非变性聚丙烯酰胺连续电泳缓冲液(10×)

蛋白质印迹（Western blotting）方法原理和优化

胶。例如：4-12%Tris-glycine凝胶适合于30-200KD蛋白质的分离，而10-20%凝胶则能成功地分离6-15KD的蛋白质。SDS-PAGE凝胶通常为1.0到1.5mm厚；但蛋白转印最好使用更薄的胶。 凝胶电泳缓冲液 最常见的凝胶电泳缓冲液由Tris-甘氨酸或Tris-tricine组成。缓冲液可以包含0.1%去污剂，通常是SDS。Tris-甘氨酸凝胶可用于分离很宽分子量范围（6-200KD）的蛋白质，并可与变性或非变性条件相容。Tris-tricine最适于分离小分子蛋白质（

凝胶迁移实验（EMSA）实验方法

标记，可以合成核酸后自行添加，部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记，生物素使用相对较多。2、形成蛋白-探针复合物（1）在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀：蛋白样本（2-5μg）Xμlpoly d(I-C)1μlBinding Buffer2μlNuclease-Free ddH2OXμl总体积9μl（2）冰浴5min后，加入1μ探针。（对照组加1ul对照探针）（3）PCR仪中室温（20-23℃）温育30min。3、制备凝胶，电泳（1）制备6.5%非变性聚丙烯酰胺

RNA琼脂糖凝胶电泳实验操作步骤与注意事项

的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 四、实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE