细胞株/稳定表达GFP细胞株

稳定表达细胞株的建立

1 、将转染后的细胞按照一定的比例接种到 6 孔板中（一般选用 1 ： 10 和 1 ： 100 两个梯度），分别采用 1200 m g/ml ， 1000 m g/ml 和 800 m g/ml 的 G418 进行筛选； 以转染携带 EGFP 质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照； 2 、每 3 ～ 4 天换液一次； 3 、筛选 20 ～ 30 天，即可得到稳定表达细胞株； 4 、传代后，以一定的 G418 浓度

真相揭秘 | 为什么构建稳定表达细胞株这样难？

受周围染色体元件的影响。    因此，要获得高产的稳定表达细胞株往往需要进行大量的筛选。     好在，还有给力的筛选系统可供选择。   G418 筛选系统 G418 筛选系统是稳定表达细胞株最常见的筛选系统。G418是一种氨基糖类抗生素，其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它通过影响核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞都有毒性，包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞，也包括原生动物和蠕虫。当载体上的neo基因被整合进真核细胞基因组合适位置后，则能启动neo基因

【求助】慢病毒相关问题

wj1989113 最近一直在做慢病毒载体，用的是第二代的三质粒系统，目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后，包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞，想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题： 1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株，荧光都很亮，但是做PCR或者Western之后，加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。（条带都较亮）尤其是Western，几乎没有差异。 2、感染