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DAPI 是一种蓝色核酸染料,优先染 dsDNA,DAPI 表现为可集中结合在 DNA 双链的 AT 小沟,结合后的 DAPI 荧光会发生 20 倍增强。 同时,DAPI 也可以结合 RNA,与 DNA 不同,一般认为 DAPI 结合于 RNA 的 AU 区。DAPI/RNA 的复合体(500nm)有比 DAPI/dsDNA 复合体(460nm)更长的荧光波长。DAPI 是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。
NF-κβ 作为一种广泛存在的转录因子,被激活由胞浆转入胞核,从而参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生等。可以将细胞 核和 NF-κβ 分别用 DAPI 和 FITC 染色,可观察每个细胞是否发生 NF-κβ 核转位,并量化分析 NFkB 核转位程度以及发生核转位细胞 的比例。
C-jun 属于即早基因(immediate early genes,IEGs)成员之一。而即早基因是原癌基因家族成员,常在细胞生长、增殖、凋亡、创伤、应 激等反应的早期出现表达变化。即早基因通常在细胞内作为第三信使,受信号通路调节后作用于核内调节靶基因的转录。
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文献和实验糖凝胶电泳来分离。通常采用脉冲电泳技术可圆满地解决这一问题。这个方法是在凝胶上外加正交的交变脉冲电场。每当电场方向改变后,大的DNA分子便滞流在爬行管中,直至新的电场轴向重新定向后,才能继续向前移动。DNA分子量越大,这种重排所需要的时间就越长。当DNA分子变换方向的时间小于电脉冲周期时,DNA就可以按其分子量大小分开。参考文献 Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves
性SNP分析等。当然,也可以作为普通PCR仪使用。ABI定量PCR仪最大的优势在于ABI已经发布十二万种Taqman Gene Expression Assays 人、大鼠、小鼠基因组基因表达分析试剂盒,覆盖人类全部4万个基因,二百万种Taqman Validated SNP Genotyping Assays 人、大鼠、小鼠基因组SNP检测试剂盒,为运用7000、7300、7500、7900型开展课题研究创造了绝佳的条件。ABI 的定量PCR仪均支持两种定量化学:TaqMan荧光探针和SYBR
或Cosmid中的未知功能序列中有时也会有这些序列,这样,通过反向PCR得到的探针就有可能与多个基因序列杂交。 利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析,探索邻接已知DNA片段的序列,并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆,建立全长的DNA探针。适用于基因游走、转位因子和已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。 图22-2 反向PCR原理示意图 波浪线代表靶DNA,方块代表测翼序列,▲和△代表限制酶切位 点,寡核苷酸引物与模板互补处标有平箭头 五、不对




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