预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究
编号：SY0348
规格：2×250μl
英文名：Prestained Protein Ladder
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
预染蛋白质分子量标准（10-180 kDa）是由10种高纯度、无污染的蛋白质构成的混合体系，这些蛋白质分别与不同的发色团（蓝、绿、橙）结合，可以产生明亮的彩色条带，用于在蛋白电泳（SDS-PAGE）和Western blotting中作为标准参照。本产品包装便利，并且在使用准备过程中不需要加热，稀释和添加还原剂。

产品特点：
显示范围宽：10种蛋白质跨越了10到180kDa的区间；
使用方便：可直接在凝胶上电泳；
条带清晰：不同颜色的条带以相似的强度呈现，更便于观察；
质量保证：每一批产品都做过SDS-PAGE和Western blotting的验证；
具有两个参照条带：橙色的条带在70kDa和绿色的条带在10kDa。
膜兼容性：在WB实验中，具有颜色的条带可以正常转移到膜上。

储存条件：-20℃，有效期1年。

产品规格
1）梯度条带：共10条蛋白条带，依次为180，130，100，70，55，40， 35，25，15和10kDa；
2）存储液缓冲体系：62.5mM Tris-H3PO4 (pH7.5，25℃)，1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3,33%甘油；
3）毒性：无。

图 4-20%SDS-PAGE胶电泳图及转膜图


使用方法
1）在室温下使标准蛋白溶液溶解。
2）轻轻地彻底地混匀，以保证溶液被混合均匀。
3）加入合适的蛋白标准的上样量：
Mini-gel: 5µl/孔（0.75-1.0mm厚）或10µl/孔（1.5mm厚）
Large-gel: 10µl/孔（0.75-1.0mm厚）或20µl/孔（1.5mm厚）

注意事项
1）标准蛋白在溶化的时候不能被煮沸，因为高温加热可能使蛋白质分子结构改变，使梯度不准确；
2）在免疫印迹实验中，蛋白质标准中的大分子蛋白（>100kDa），可能需要更长的转移时间或者更高的转移电压，才能完成转移；
3）该预染蛋白在不同的SDS-PAGE buffer系统中可能会有误差，但是它们在被非预染蛋白标准在相同缓冲体系中校准后，可以做分子量接近的蛋白质的测定；
4）为了您的安全健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

想要了解更多关于预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
BL0933 RBITC标记兔抗狗IgG抗体
SJ0006 微晶纤维素 α-Cellulose
F010114 小鼠抗伏马菌素B1抗体 Monoclonal Mouse Anti-Fumonisin
碱性磷酸酶 Silver carbonate 9001-78-9
S-腺甘蛋*酸 Dimethylamin*(代"e") hydrochloride 29908-03-0
ARB13551 兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa检测 Rabbit β-thromboglobulin,β-tg ELISA KIT
ARB14200 小鼠肌动蛋白(Actin)ELISA代测服务 
D0101 脱纤维新生牛血(无菌 pet瓶装) 100ml/200ml/500ml
86-74-*(代"8") Carbazole 咔唑
N-乙酰-L-丙*酸 Trans-Ferulic acid 97-69-8
RN3301 PLANTpure 通用植物总RNA快速提取试剂盒
F040305 猪IgG抗原 Pig IgG
C1501 狗血清(无菌过滤)
BFD034 磺胺多残留快速检测试剂盒
钯碳加*催化剂 1,8-Dihydroxyanthraquinone 7440-05-3
6-正丙基-2-硫代尿嘧啶 Gibberllin A4+7 51-52-5
ARB11966 大鼠CD3分子(CD3)Elisa方法检测 Rat cluster of differentiation 3,cd3 ELISA KIT
ARB13666 兔白细胞介素1(IL-1)尿液中含量检测 Rabbit  interleukin 1,IL-1ELISA KIT
PY02-172  欧氏液  100克  
ARB10441 人甲状腺素(T4)定量分析 Human thyroxine,t4 ELISA KIT
预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究关键词：SY0348,预染蛋白质分子量标准,Prestained Protein Ladder,预染蛋白质分子量标准(10～180kDa)


·高保真DNA聚合酶
编号：SY0057
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：100U
Pfu DNA Polymerase 是基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/53，是Pfu酶的1/6；

与上一代Pfu DNA Polymerase相比，Pfu中添加了独特的延伸因子、特异性促进因子以及平台期解抑制因子，使其长片段扩增能力、扩增特异性性以及扩增产量方面得到了大幅度提升：1）使用λDNA、质粒等简单模板，Pfu 可以有效扩增长达40 kb的片段；2）使用基因组DNA等复杂模板，Pfu可以有效扩增长达20 kb的片段；3）使用cDNA模板，Pfu可以有效扩增长达10 kb的片段。此外，Pfu对PCR抑制剂具有良好的抵抗能力，可用于细菌、真菌、植物组织、动物组织或全血样品的直接PCR。II Pfu中添加了在常温下能够抑制其5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动PCR。

该酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，扩增产物为平端。

产品组份：
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
2×PCR buffer：1.25 ml×2
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
10×Loading buffer：1.25ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

1 推荐反应体系及反应程序

1.1 反应体系配制：
a. 所Pfu DNA Polymerase 是基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/53，是Pfu酶的1/6；

与上一代Pfu DNA Polymerase相比，Pfu中添加了独特的延伸因子、特异性促进因子以及平台期解抑制因子，使其长片段扩增能力、扩增特异性性以及扩增产量方面得到了大幅度提升：1）使用λDNA、质粒等简单模板，Pfu 可以有效扩增长达40 kb的片段；2）使用基因组DNA等复杂模板，Pfu可以有效扩增长达20 kb的片段；3）使用cDNA模板，Pfu可以有效扩增长达10 kb的片段。此外，Pfu对PCR抑制剂具有良好的抵抗能力，可用于细菌、真菌、植物组织、动物组织或全血样品的直接PCR。II Pfu中添加了在常温下能够抑制其5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动PCR。

该酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，扩增产物为平端。

产品组份：
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
PCR buffer：1.25 ml×2
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
10×Loading buffer：1.25ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

1 推荐反应体系及反应程序

1.1 反应体系配制：
a. 所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止II Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。、

 

ddH2O	to 50 μl
2×PCR buffer a	25 μl
dNTP Mix(10 mM each)b	1 μl
模板DNAc	optional
引物1(10 μM)	2 μl
引物2(10 μM)	2 μl
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)d	1 μl

【注】：a. 2×II PCR buffer中已含有Mg2+，终浓度为2mM。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

基因组DNA	50 ng～400 ng
质粒或病毒DNA	10 pg～30 ng
cDNA	1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)

d. 推荐的酶的终浓度为1U/50 μl反应。然而，根据扩增子的长度和复杂程度不同，可将酶的使用量在0.5-2U/50 μl反应之间进行优化。II Pfu DNA Polymerase具有较强的校对活性，因此，如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。
1.2 一般PCR反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec～3 min	1
变性	95℃	15 sec	25～35循环
退火b	56℃～72℃	15 sec
延伸c	72℃	30～60sec/kb
彻底延伸	72℃	5 min	1

【注】：a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃，时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组/cDNA为3 min；
b.一般来说，退火温度设置为引物Tm值。如引物Tm值≥72℃，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤(两步法PCR)。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找最适引物模板结合温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性。如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度，每次+3℃。

c.延长延伸时间有助于提高扩增产量。
1.3 长片段PCR 扩增：
*使用高质量的模板，提高模板使用量；
*使用长引物。
*当推荐程序无法进行扩增时，建议尝试下述Touch Down两步法PC
*Touch Down两步法推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	15 sec	5
延伸	74℃	60 sec/kb
变性	95℃	15 sec	5
延伸	72℃	60 sec/kb
变性	95℃	15 sec	5
延伸	70℃	60 sec/kb
变性	95℃	15 sec	5
延伸	68℃	60 sec/kb
彻底延伸	68℃	5 min	1

2. 复杂样品的扩增
Pfu具有卓越的长片段扩增能力、扩增特异性以及扩增产量，对许多PCR抑制剂具有良好的抵抗能力，可用于细菌、真菌、植物组织、动物组织或全血样品的直接PCR。推荐扩增的样品类型：

样品类型	扩增方式	推荐操作方式（50µl体系）
全血	直接扩增	吸取1-5µl作为扩增模板
滤纸干血渍	直接扩增	剪取1-2mm2滤纸作为扩增模板
培养细胞	直接扩增	取少量细胞作为扩增模板
酵母	直接扩增	挑取单克隆或1µl菌液作为模板
细菌	直接扩增	挑取单克隆或1µl菌液作为模板
霉菌	直接扩增	挑取少量作为扩增模板
精液	直接扩增	吸取少量作为扩增模板
浮游生物	直接扩增	挑取少量作为扩增模板
植物组织	直接扩增	剪取1-2 mm2 组织作为扩增模板
小鼠尾巴	裂解后吸取裂解液扩增	吸取1-5 μl 裂解液作为扩增模板*
食品	裂解后吸取裂解液扩增	吸取1-5 μl 裂解液作为扩增模板*

*样品裂解液制备过程：

**Lysis Buffer：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM EDTA，0.1% SDS，pH 8.0。(需自备)

引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) 蛋白质研究关键词：SY0348,预染蛋白质分子量标准,Prestained Protein Ladder,预染蛋白质分子量标准(10～180kDa)


·ATF6-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0091
英文名称：ATF6 luciferase reporter plasmid
规格：1μg
ATF6荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（ATF6 luciferase reporter plasimd）是用于检测ATF6转录活性水平为目的的报告基因。ATF6(Activating Transcription Factor 6)是一种内质网应激调节时的跨膜转录因子。内质网中错误折叠蛋白的积累将导致ATF6的溶蛋白性裂解。胞质部分的ATF6进入细胞核作为转录因子引起ER chaperones的转录。ATF6的激活将预示着多种疾病的发生，例如：心肌梗塞、动脉粥样硬化和神经退化疾病等。

ATF6报告基因主要用于检测细胞中ATF6基因的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMATF6-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ATF6结合位点，可以高灵敏度地检测ATF6的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ATF6报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMATF6-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

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