GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：GAS luciferase reporter plasmid
编号：SY0084
GAS荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（GAS luciferase reporter plasimd）是用于检测GAS转录活性水平为目的的报告基因。GAS(gamma-activated sequence,GAS) 又称γ干扰素活化序列在皮肤发生迟发型接触性过敏时，可与转位至角朊细胞核内的STAT-91结合而激活K17的表达。

GAS报告基因主要用于检测细胞中干扰素调控的信号通路的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMGAS-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个GAS结合位点，可以高灵敏度地检测GAS的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得GAS报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMGAS-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

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BL1369 RNA病毒基因组提取试剂盒
ARB11035 人妊娠疱疹抗体(HG)Elisa方法检测 Human herpes gestation,hg ELISA KIT
4-甲氧基*乙酮 2,2"-Biphenol 100-06-1
N-羟基琥珀酰亚胺生物素 DPG 35013-72-0
PY02-312  硫化*(代"*")试验琼脂  250克  
ARB10510 人白细胞介素22(IL-22)含量分析 Human interleukin 22,IL-22 ELISA KIT
ARB11087 人果糖1,6二磷酸醛缩酶(FDA)检测服务 Human fructose-1,6-bisphosphate aldolase,fda ELISA KIT
ARB13520 鱼维生素D3(VD3)ELISA含量检测 
CYB163058 羊抗鸡IgG-RBITC
ARB12837 小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa测定使用说明书 Mouse macrophage inflammatory protein 2,mip-2 ELISA KIT
ARB13928 猪转化生长因子β2(TGF-β2)酶免分析 Porcine transforming growth factor β2,tgf-β2 ELISA KIT
25988-63-0 Poly-L-Lysine   多聚-L-赖*酸(3-7万)
BL1157 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒
PY02-008  乳糖胆盐发酵培养基  250克  
ARB10355 人心肌特异性肌*蛋白T(cTnT)定量分析 Human cardiac isoform of tropnin t,ctnt ELISA KIT
GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测关键词：GAS luciferase reporter plasmid,GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒,SY0084


·Hoechst 33342染液(即用型)
编号：SY0499
规格：10ml
本系列产品均以溶液形式提供，其中Hoechst 33342染液(1mg/ml)（SY0563）为特定浓度的产品，其浓度为1mg/ml。用于细胞核染色时，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。Hoechst 33342染液(即用型)（SY0499）为浓度经过优化的产品，确保可以满足各种常规染色的需要。

Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

中文名称：二*甲亚胺, 三*化* 2-(4-乙基*基)-5-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基)-2,5-二-1H-*并咪唑
英文名称：2’-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93 
CAS：23491-52-3 
纯度：≥95%（HPLC）
储存条件：4℃，有效期6个月
结构式


使用方法
1. 用PBS或合适的缓冲液制备 10～50µM Hoechst33342染色液。
2. 固定的细胞或组织染色：
对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
b) 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
c) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

3. 活细胞或组织染色：
a) 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
b) 在 37℃培养细胞 10～20 分钟。
c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

注意事项
1) Hoechst 33342 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2) 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3) 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测关键词：GAS luciferase reporter plasmid,GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒,SY0084


·腔肠素e
编号：SY0241
英文名称：Coelenterazine e
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素e（Coelenterazine e），一种天然腔肠素衍生物，结构上比天然腔肠素多了一个乙基。作为海肾荧光素酶的底物，其荧光强度是天然腔肠素的137%。腔肠素e具有最高的体外水母发光蛋白反应性，且具有双发射峰（405& 465），从而可在pCa 5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度，由于该法不依赖于腔肠素浓度，因此提高了检测精确性。但对于细胞内相关实验则无此优势，因为该衍生物的细胞通透性较差。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

英文别名：e-CTZ; e Coelenterazine
CAS：114496-02-5
分子式：C28H23N2O3
分子量：449.5
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不溶于DMSO
外观：黄色至橘色固体
纯度：≥95%（TLC）
结构：


注意事项
1） 腔肠素e粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素e氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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