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上海信帆生物
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100管/48样
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文献和实验【求助】土壤微生物总DNA的提取及细菌16S rDNA的PCR扩增出问题了,寻求大家的帮助!
tyuanc 我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA,提取的DNA直接跑胶,看不见任何条带,采用细菌16S rDNA通用引物(27F和1492R)进行PCR扩增,也没有结果,有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后,进行细菌16S rDNA的PCR扩增,扩增出了目的条带,我所用的酶为Takara的LA Taq,用普通的Taq酶扩增不出来,但隔了一周后再去重复,什么条件都一样,却再也扩不出来了,我重新提取了新的DNA进行
这周讨论一项常用的技术,即使常用但仍引起部分人核酸分离焦虑症。那就是基因组DNA的纯化去杂质。 场景是这样的:你有一份采自南太平洋中部一个偏僻小岛上首次发现的古老兰花品种根际土壤样品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最终DNA含有太多杂质,无法PCR扩增。因此需要去除腐植酸等PCR抑制因子。你需要所有的核酸分子通过全基因组鸟枪测序……怎么办? 你致电MO BIO说了你的大概情况,而我们推荐了使用PowerClean Kit
知己知彼,既要对研究对象(土壤)熟知,又要对研究工具(试剂盒)熟悉。 土壤中重要物质腐殖质 土壤除了为陆生植物提供营养源和水分之外,还是植物生长,进行光合作用、能量交换的主要场所;同时也具有微生物生长繁殖所需要的一切营养物质及各种条件,是微生物良好的生活场所,有“微生物的天然培养基”之称。因此土壤是一种重要的环境要素。 简单说,土壤是由固相(矿物质、有机质)、液相(土壤水分或溶液)和气相(土壤空气)三相物质四种成分有机地组成。而所有这些组成在土壤微生物的存在
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