V型AAO模板 开口400nm 下端100nm

经验分享｜动物活体光学成像实验——荧光成像（一）【自发荧光】

动物活体荧光成像实验中，一般利用荧光蛋白选择性地标记目标细胞，或用荧光染料标记药物，再通过活体成像系统进行详细观察。但是在荧光成像过程中，当观察目标的荧光信号微弱时，自身荧光会干扰目标荧光的识别。自发荧光是指由细胞结构或代谢产物等产生的自然荧光。从小分子（糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸、离子和水等）和大分子（蛋白质、磷脂、RNA、DNA 和多糖等）到更大的结构（如细胞器和细胞膜），覆盖了大部分可见光谱范围（400-700 nm）。自发荧光与标记物发射波长重叠的时候，经激发光照射会发射出与标记物相

Caspase活性检测系列（分光光度法）检测原理及操作指南

并混匀，注意避免气泡产生。 E、在加入Ac-特异性多肽-pNA混匀后，37℃孵育2~4 h。发现颜色变化较明显时即可测定OD405。如果颜色变化不明显可适当延长孵育时间，甚至可孵育过夜。 F、用酶标仪或分光光度计（100 μL比色皿）在λ=405 nm或400 nm测定样本吸光值。 G、通过计算OD样本值/OD阴性对照的倍数来确定凋亡诱导剂组Caspase 3的活化程度。 四、结果判断 Caspase的活性与AC-特异性多肽-pNA的分解量强弱成正比。 参考

经验分享｜动物活体光学成像实验——荧光成像（四）【染料推荐】

散射事件。这将会导致在荧光图像中出现信号模糊的情况，这种情况对于远离激发光源和探测器（CCD）的荧光目标会被放大。散射的另一个重要结果是，它放大了组织荧光团的波长变化，导致检测到的荧光光谱的形状和峰值位置根据组织中光所走过的路径长度而变化。 组织吸收： 组织内的微观成分从小分子（糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸、离子、水等）和大分子（蛋白质、磷脂、RNA、DNA、多糖等）到更大的结构（如细胞器和细胞膜等）通过可见光波长范围（400-700 nm）时，因为组织成分在这个波长范围内的吸收限制，削弱了有效