细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：50次
编号：WE0265
  本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer A	50ml
Buffer B	3ml
Buffer C	25ml
Protease Inhibitor Cocktail	750μl

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：2～8℃

注意事项：
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。

使用方法：

一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞，计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1、取材，保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量，每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

储存条件：-20℃

关于细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·蛋白银染试剂盒
编号：WE0281
英文名称：Protein Silver Stain Kit
规格：20次
  本试剂盒采用高灵敏度的银染染料，可应用于变性胶及非变性胶的蛋白染色，具有目的条带清晰、背景低，操作时间可灵活控制的优点。另外，本试剂盒增加了一步短时敏化作用步骤，可明显降低背景及提升目的条带的亮度。

试剂盒组成：

组份	20次
Silver Stain Sensitizer(500×)	2×1ml
Silver Stain Enhancer	3ml
Silver Stain	2×250ml
Silver Stain Developer	4×125ml

注意事项：
1、请提前准备50ml固定液(超纯水：乙醇：冰醋酸=6:3:1)、50ml洗脱液(10%乙醇)和50ml终止液(5%的冰醋酸)。
2、操作时请使用去离子水和洁净的玻璃或塑料器皿，须戴一次性手套进行操作。
3、整个银染过程需在摇床上进行，摇床转速约60 rpm左右。
4、需自备乙醇，冰醋酸。

操作步骤：
  以下操作步骤中各溶液的用量以大小为8.5×5.5 cm、厚度为1.0 mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，置于摇床上操作，一般用量25ml。对于大型凝胶，各溶液的使用量需按凝胶体积的比列放大。
  请提前准备好50ml固定液(超纯水：乙醇：冰醋酸=6:3:1)、50ml洗脱液(10%乙醇)和50ml终止液(5%的冰醋酸)。
1、水洗：电泳完成后，用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。
2、固定：用25ml固定液固定凝胶2次，每次固定15分钟。
3、洗脱：用洗脱液洗胶2次，每次洗涤5分钟。
4、水洗：用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。
5、增敏：将上一步洗好的凝胶置于银染增敏工作液中，室温下准确孵育1分钟后用超纯水洗胶3次，每次洗涤20秒。
银染增敏工作液的配制：取50μl Silver Stain Sensitizer(500×)加入到25ml超纯水中，混匀。
6、银染：弃去超纯水，将凝胶置于银染工作液中孵育30分钟。
银染工作液的配制：取25ml Silver Stain加入50μl Silver Stain Enhancer混匀。
7、水洗：用超纯水快速洗胶2次，每次洗涤准确控制为20秒。
8、显影：立即将洗好的凝胶浸没在显影液中，室温孵育2-3分钟，直至蛋白条带显示清晰。
显影液的配制：取25ml Silver Stain Developer加入30μl Silver Stain Enhancer混匀。
注意：显影30秒内，蛋白条带开始显现，继续显影至2-3分钟。若蛋白条带显色较浅，可适当延长显影时间至5分钟及以上。
9、终止：用终止液洗去凝胶上的显影液后，将凝胶浸泡在新的终止液中反应10分钟。

实验图例

BSA蛋白样品经过10%的SDS-PAGE凝胶电泳后银染结果
BSA蛋白分子量约为66 kD，上样量从左到右分别为50ng，10ng，5ng

储存条件：室温。


细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价关键词：WE0265,Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit,细胞核/浆蛋白抽提试剂盒


·BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)
编号：WE0154
英文名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)
规格：1ml|5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融


细胞核/浆蛋白抽提试剂盒优惠价关键词：WE0265,Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit,细胞核/浆蛋白抽提试剂盒

F030434 胶体金标记山羊抗人IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*GOLD
HC0022 96孔PCR板
ARB11365 人前白蛋白(PA)含量分析 Human prealbumin,pa ELISA KIT
81-88-9 Rhodamine B 罗丹明B
ARB13535 兔儿茶酚胺(CA)elisa检测说明书 Rabbit catecholamine,ca ELISA KIT
62625-32-5 Bromocresol Green sodiu*(代"m") salt *甲*(代"酚")绿
PY01-110  6-苄*基嘌呤  1克  
碱性红1:1 DL-3-Aminoisobutyric acid 3068-39-1
ARB12993 小鼠抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)酶免分析 Mouse anti-cardiolipin antibody iga,aca-iga ELISA KIT
F030421 胶体金标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*GOLD
链脲佐菌素 CBZ-L-Tryptophan 18883-66-4
PP0501 新型快速蛋白染色试剂盒
BOC-N-β-Trityl-L-天门冬酰胺 Aminomethyl resin 132388-68-2

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