HSPA5重组蛋白

  
产品名称：HSPA5重组蛋白
英文名称：Recombinant Heat Shock 70kDa Protein 5 (HSPA5)
英文简称：MIF2; BIP; GRP78; Immunoglobulin heavy chain-binding protein; Glucose Regulated Protein 78; Binding Immunoglobulin Protein; Endoplasmic reticulum lumenal Ca binding grp78
物种：(Human，人)；(Mouse，小鼠)； (Rat，大鼠)等其它种属。
来源：原核表达
宿主：E.coli
性状：冻干粉
规格：10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。
应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。
重组蛋白质表达系统有以下三类,各有的特点：

原核表达系统	真核表达系统	无细胞表达系统
原核主要是大肠杆菌表达系统，方便，便宜，周期短，但有些蛋白会折叠不好，不带有糖基化等修饰。	真核包括酵母表达系统、杆状病毒-昆虫细胞表达系统、腺病毒表达系统等。一般能正确折叠，含有各种修饰。但价格高，周期长。	无细胞系统一般要靠公司来做，价格高。

真核系统和原核系统各自优缺点：

表达系统		系统优缺点	系统蛋白表达方式	优点	缺点
真核表达系统	哺乳动物细胞	表达的蛋白活性高，能够表达多复杂修饰 的蛋白；需要细胞房，无菌，成本投入高	瞬时转染	能够快速灵活的制备活性蛋白	蛋白表达量低，大量生产成本极高
			稳定细胞系构建	筛选出的细胞株能够实验蛋白的大量生产	细胞株筛选困难且时间长，投入大
			重组抗体表达	比普通单抗生产量有保证	需筛选细胞株，需耗时耗力
	酵母表达系统	与哺乳动物相比只能表达简单修饰的蛋白	毕赤酵母表达	甲醇诱导操作方面	需要时间
			酿酒酵母表达	不常用	不常用
	昆虫表达系统	不常用
原核蛋白表达系统	大肠杆菌表达	操作简单。表达量高； 易形成包涵体，蛋白活性物保证
	枯草芽 孢杆菌表达	不常用
	链霉菌	不常用

HSPA5重组蛋白是一种简单、高效的方法：通过优化目的基因的5'部分DNA序列，而且不需要通过软件预
测，完全随机，包含所有可能（理论上），且不改变氨基酸序列。
原理：蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。可参考文章来设计简并序列。
HSPA5重组蛋白实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
HSPA5重组蛋白分离纯化原则总结：
1.应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术，而不是利用相同技术多次纯化；
2.不同的蛋白在性质上有很大区别，每一步纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质差异；
3.在纯化早期阶段要尽量减少处理体积，方便后续纯化；
4.在纯化后期阶段，再使用造价高的纯化方法，有利于纯化材料的重复使用，减少再生复杂性。