北京高效cDNA第一链合成试剂盒现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京高效cDNA第一链合成试剂盒现货在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：高效cDNA第一链合成试剂盒
品牌：百奥莱博
英文名：MMLV cDNA Synthesis Kit
编号：WE0131
产地：国产|进口
规格：100次
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解，更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强，可得高产量的cDNA，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

试剂盒组成：

 

组份	100次
MMLV，200 U/μl	100μl
5×RT Buffer	500μl
Primer Mix	240μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	500μl
DTT，0.1 M	240μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点
1、RNase H-：经突变的MMLV逆转录酶，RNase H活性缺失，更易获得全长cDNA。
2、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

操作步骤：
注意：10ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV，200 U/μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
RNase-Free Water	up to 13μl

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV(200U/μl)	1μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6、轻轻吹打混匀，42℃孵育50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。
关键词：WE0131,高效cDNA第一链合成试剂盒,MMLV cDNA Synthesis Kit


关于北京高效cDNA第一链合成试剂盒现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

 

编号	名称
WE0274	蛋白标准溶液BSA
WE0317	水性封片剂
WE0359	FITC标记兔抗人IgG(H+L)
WE0258	RIPA裂解液(强)
WE0363	HRP标记兔抗绵羊IgG(H+L)
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)
WE0187	土壤基因组提取试剂盒
WE0339	抗RFP标签单克隆抗体
WE0287	SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
WE0270	Protein G琼脂糖凝胶
WE0337	抗Flag标签单克隆抗体
WE0224	RNase A溶液(10mg/ml)
WE0301	X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
WE0243	Super DNA Ladder
WE0398	游离DNA样本保存管(10ml)
WE0263	酵母蛋白抽提试剂盒
WE0381	Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0290	G250蛋白快速染色试剂
WE0173	植物基因组DNA提取试剂盒
WE0106	2×BAmp MasterMix(含染料)
WE0293	SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
WE0247	TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体，连接酶)
WE0319	EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×)
WE0316	通用型免疫组化试剂盒(鼠兔源一抗)
WE0178	细菌基因组DNA提取试剂盒
WE0351	抗His标签多克隆抗体
WE0325	Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
WE0183	游离DNA提取试剂盒
WE0130	Real-time RT-PCR MasterMix
WE0141	快速实时荧光定量PCR预混体系
WE0196	固定组织RNA提取试剂盒
WE0397	游离DNA样本保存管(5ml,PET)
WE0330	抗His标签抗体琼脂糖介质
WE0245	1kb DNA Ladder
WE0167	高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
WE0151	快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)
WE0109	Babuddy超保真DNA聚合酶