高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)哪里买

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)哪里买在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)哪里买
规格：25次|100次
编号：WE0128
英文名：UltraRT cDNA Synthesis Kit
产地：国产|进口
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒使用的逆转录酶是一种利用大肠杆菌工程菌进行重组与表达的全新高效逆转录酶，去除了RNase H活性并增强了其热稳定性，可利用极低量的总RNA或mRNA合成cDNA第一链，起始样本量可低至pg级。UltraRT逆转录酶与RNA亲合能力强，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板，获得高产量的cDNA。
  本试剂盒包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，含有Super RT高效逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
UltraRT，200 U/μl	25μl	100μl
5×UltraRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	60μl	240μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	120μl	500μl
RNase-Free Water	1ml	1ml

产品特点：
1、高效逆转录：与RNA模板亲和力高，逆转录效率高达90%，可识别pg级别的模板。
2、自由应对复杂模板：即使GC含量高，二级结构复杂的模板，无需高温变性，也可得到良好结果。
3、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

使用方法：
注意：1ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I逆转录操作步骤：

1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
5×UltraRT Buffer	4μl	1×
UltraRT，200 U/μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
a.若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
b.Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议 20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50 pmol，或Gene Specific Primer 2pmol。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：

1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配置反应体系，总体积为15μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
RNase-Free Water	up to 15μl

注意： Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×UltraRT Buffer	4μl	1×
UltraRT，200 U/μl	1μl

注意：若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
6、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)哪里买，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
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·FITC标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0385
英文名称：Rabbit Anti-Goat IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)

·抗V5标签单克隆抗体
编号：WE0343
英文名称：Anti V5 Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
V5标签是从猿病毒5(SV5)副粘病毒P蛋白和V蛋白中分离得到的由14个*基酸残基组成的多肽(GKPIPNPLLGLDST)。该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的V5标签，不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的V5-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(1：1000-10000)

·TA快速连接试剂盒(pUC-T)
编号：WE0249
英文名称：pUC-T TA Cloning Kit
规格：20次
  pUC-T TA载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在EcoR V酶切位点处切开，在两侧的3"端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，它可以与pUC-T 3"端的T互补连接，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。
  试剂盒中配备高效率的T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入。克隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。

试剂盒组成：

组份	20次
pUC-T(50ng/μl)	20μl
Control Insert(50ng/μl)	10μl
Quick T4 DNA Ligase	20μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	120μl

注意事项：

1、Insert DNA 要求
1)连接使用的PCR片段3’末端应带有“A”尾。有些高保真DNA聚合酶，如我公司的Pfu扩增的PCR产物是平滑末端，可使用加A试剂盒加上A尾后，再进行T载体克隆。
2)PCR产物建议进行切胶回收纯化后再进行T载体克隆，以免PCR产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。推荐使用WE0168快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

2、连接反应要求
1)本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2)2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3)由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

3、感受态细胞要求
建议使用高效的热击转化感受态细胞，这样才可能得到比较理想的阳性克隆，如需进行蓝白筛选，宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ ΔM15】)产生ω片段，才能与载体DNA产生的LacZ α 多肽结合，表现出β-半乳糖苷酶活性(α互补)。pUC-T TA载体以pUC18载体为基础构建而成，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用。推荐使用本公司WE0251 TOP10感受态细胞、WE0252 DH5α感受态细胞。

4、阳性克隆筛选
阳性DNA片段成功插入至pUC-T Vector中后，一般情况下β-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体培养基上培养时将显示白色菌落。但有时比较短的DNA片段插入载体时，基因的读码框有可能正好与LacZ的读码框相吻合，克隆体也会显示蓝色菌落。

5、阳性对照
为了确认实验操作的正确性，以及实验试剂的有效性，我们建议使用本试剂盒中配备的Control Insert(750 bp)进行阳性对照实验。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	反应体系	对照体系
pUC-T	1μl	1μl
DNA 插入片段	0.1 -0.3 pmol	--
Control Insert DNA	--	1μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	5μl	5μl
Quick T4 DNA Ligase	1μl	1μl
RNase -Free Water	补足至10μl	补足至10μl

注：Insert DNA的使用量：在进行克隆时，Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为：1:2-1:10，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。Insert DNA的使用量=nmol数×660×Insert DNA bp数。本载体1μl(50ng)的摩尔数约为0.03 pmol。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：勿进行加热失活反应。
4、将连接产物加入50μl感受态细胞中(将感受态细胞置于冰上融化)，冰浴30分钟。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、42℃热击45秒钟，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6、加入450μl无菌SOC或LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟，使菌体复苏。
7、根据实验要求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃，直至液体被吸收后，倒置培养，37℃培养12-16小时。
8、计算白、蓝色菌落，挑选白色菌落，使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。



储存条件：-20℃。


高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)哪里买关键词：UltraRT cDNA Synthesis Kit,微量样本,高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本),WE0128

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