北京高效无内毒素质粒大量提取试剂盒现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京高效无内毒素质粒大量提取试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
英文名：NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格：2次|10次
产地：国产|进口
  本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。

  为什么使用本试剂盒？：内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。

试剂盒组成：

 

组份	2次	10次
Buffer P1	30ml	125ml
Buffer P2	30ml	125ml
Buffer E3	30ml	125ml
Buffer PS	15ml	30ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml	50ml
Endo-Free Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl	2ml
推柄	2个	10个
内毒素过滤器FQ	2个	10个
吸附柱DQ及收集管	2套	10套
离心管(50ml)	2个	10个

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入)，混匀，置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，12000×g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟，将上清全部倒入除内毒素过滤器中，慢慢推动推柄(Plungers)过滤，滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意：Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。
注意：加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65－70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)
关键词：高效无内毒素质粒大量提取试剂盒,NoEndo Plasmid Maxi Kit,WE0167


北京高效无内毒素质粒大量提取试剂盒现货极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

 

编号	名称
WE0301	X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
WE0226	人类基因组DNA
WE0261	细菌蛋白抽提试剂盒
WE0125	高保真多重PCR Mix(下一代测序用)
WE0373	FITC标记山羊抗大鼠IgG(H+L)
WE0173	植物基因组DNA提取试剂盒
WE0354	抗β-Actin单克隆抗体
WE0199	细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0131	高效cDNA第一链合成试剂盒
WE0307	低背景ECL化学发光检测试剂盒
WE0330	抗His标签抗体琼脂糖介质
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)
WE0260	组织蛋白抽提试剂盒
WE0264	植物蛋白提取试剂盒
WE0360	FITC标记驴抗小鼠IgG(H+L)
WE0358	DyLight594标记山羊抗人IgG(H+L)
WE0338	抗MBP标签单克隆抗体
WE0394	HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0283	Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
WE0220	X-gal溶液(20mg/ml)
WE0308	高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
WE0106	2×BAmp MasterMix(含染料)
WE0120	血液直接PCR扩增试剂盒
WE0149	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
WE0126	防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)
WE0208	磁珠法血液DNA提取试剂盒
WE0402	唾液DNA样本保存管
WE0349	抗HA标签单克隆抗体
WE0228	二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)
WE0293	SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
WE0212	蛋白酶K
WE0343	抗V5标签单克隆抗体
WE0155	BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)
WE0159	dNTP混合溶液(10 mM)
WE0269	GST琼脂糖凝胶