北京现货植物线粒体DNA提取试剂盒怎么卖

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货植物线粒体DNA提取试剂盒怎么卖在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货植物线粒体DNA提取试剂盒怎么卖
规格：50T/100T
编号：XH002
品牌：百奥莱博
储存条件：2～8℃，有效期一年。DNASE I -20℃保存。使用前，在DNase I中加入600ul（50T）或者1200ul（100T）的DNA酶反应液，分装后-20℃保存三个月，如果超过三个月，活性可能会降低，请自行订购DNASE I。线粒体裂解液使用前常温保存，如有沉淀可37℃水浴溶解，不影响使用。
三，说明
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心得到比较纯净的线粒体，再利用DNA酶消化和裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA，最后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从植物叶片中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体DNA的提取制备。
四，操作步骤
准备工作：在DNASE I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，适当分装后-20℃保存。线粒体裂解液保存于常温，如有沉淀37℃水浴溶解，离心机温度下降到4℃（2-8℃），如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min，但最后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。
1. 样本采集前处理：无论田间自然生长还是实验室组织培养，采摘前须避光生长24-48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量植物细胞裂解液，加入0.5% β-巯基乙醇，10ml 植物细胞裂解液加入50ulβ-巯基乙醇，混匀，形成植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液，此溶液可2-8度保存一个月。
2. 叶片用蒸馏水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件请用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入1.5ml预冷的植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液，混匀。如果无条件（无液氮），请预冷研钵，取洗过的叶片1000 mg，用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的植物细胞裂解液/β-巯基乙醇溶液，冰上研磨至看不见明显组织块；
3. 将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000× g 离心5 min；
4. 将上清转移到一新的离心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀，再次4℃，1000× g 离心5 min，取上清；合并两次上清，将上清4℃ 1000× g 再次离心5 min。
5．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 16,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；
7．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 16,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
8. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入10ul DNASE I溶液（见准备工作），混匀，37℃水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃， 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清，再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀，4℃， 12,000 × g 离心5 min，洗去残留的DNA酶。
9.得到的沉淀，用200ul TE缓冲液重悬线粒体沉淀，加入10ul RNase A。加入200ul线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置1-2min，再加入150ul蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃， 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。
10．取上清，加入一新的离心管中（如用于酶切分析，可加入此步：选用等体积的酚*仿异戊醇25:24:1抽提一次，再用*仿抽提一次，或者直接用*仿抽提两次，一般来说，此步可去掉一些微量蛋白及糖类，但会造成线粒体DNA的损失，因而用于PCR时可省，并不影响后续实验），加入0.6倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA，如离心管太满可分两管）及5-10ul 核酸核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃， 12,000 × g 离心10 min。
11. 弃上清，再加入1ml 70%乙醇清洗，4℃， 12,000 × g 离心5min。重复用70%乙醇洗一次。
12. 弃上清，再次离心1min 吸弃上清，不要碰到管底，开盖凉干约5-105min。
13．加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底，37℃水浴5分钟，线粒体DNA溶解。
14. 进行DNA电泳检测及-20℃保存，进行下步的实验。
四 注意事项：
1. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
3. β-巯基乙醇有毒，请注意通风及防护

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；
[rpm] ２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。

北京现货植物线粒体DNA提取试剂盒怎么卖正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·FITC－羊抗人IgG
编号：XH096
规格：0.5ml/5ml
荧光素标记抗体，是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病毒学及自身抗体的临床免疫诊断之中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。
我们生产的荧光素标记羊抗人IgG是将异硫*酸荧光素（FITC，来源于SIGMA），经过常规方法标记在抗体羊抗人IgG（来源于我公司自己纯化的抗体）分子上，经过过柱，透析，定量，加入稳定剂等，制成FITC－羊抗人IgG。
储存条件：-20℃冻存。
浓度：抗体2mg/ml。
应用范围：FITC－羊抗人IgG主要用于一抗来源于人多抗（单抗也行）的后续实验。如免疫组化。

主要性能：
FITC为Sigma异构体I，最大吸收峰为495nm，最大发射峰为525nm。
工作液用0.01mol/L pH7.4PBS作1：5～1:20稀释使用，稀释过的抗体尽快用完，不要冻融。

·SABC(山羊IgG)-POD免疫组化试剂盒
编号：XH114
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液（5%BSA）：10ml。
2， 3% H2O2：10ml。
3， Bio-兔抗山羊IgG：浓缩液100ul。
4， SABC-POD:浓缩液100ul。
5， 稀释液：30ml。
6， 显色液（1ml+1ml）:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B。
试剂盒保存：如果一段时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，封闭液和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用
试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验. DAB显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖*酸。
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸*缓冲液
4、苏木素
实验步骤: 微量试剂请离心后使用
以石蜡切片为例
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2. 3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.4）洗涤1-2次。b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟， PBS（pH7.2-7.6）洗涤2-3次。c、跳过此步，直接进入下一步。
4． 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
5．用稀释液将一抗（如山羊抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据使用量，用稀释液将Bio-兔抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
7．根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
8．DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞片，常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。

对于冰冻切片，固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。


因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。


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