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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括BCA蛋白浓度测定试剂盒优惠促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:BCA蛋白浓度测定试剂盒优惠促销
产地:国产|进口
规格:500微孔
本试剂盒自订购之日起一年内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做500孔。当使用2ml比色皿时可做50孔,如果是1ml比色皿时可做100孔。
产品简介
碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
使用说明
一,微孔酶标仪法
1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。
3. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二,分光光度计法、
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下:
1.配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
2, 稀释标准品:取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。
3, 取八支(或者更多)5ml离心管,标让号,按下表加入试剂。
4, 37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。
BCA蛋白浓度测定试剂盒优惠促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·Tris-甘*酸蛋白电泳缓冲液(干粉)
编号:XH059
规格:10L
所用试剂:Tris碱,甘*酸和 SDS
含量配方: 30.3 Tris碱
188g 甘*酸
10g SDS
此产品为干粉混合物。用时可以用双蒸水溶解成1L,配成10倍浓缩液,用时再稀释10倍。
配好的电泳液用于SDS-PAGE蛋白电泳。可反复使用三到五次,如果发现有明显沉淀或者漂浮时,请丢弃换新的。
·载体两性电解质PH4-9
编号:XH072
规格:12ml
别名:两性电解质两性电解质载体(PH4-9):Ampholyte solution、Ampholine。
性状;近无色至浅黄色透明液体,有粘性,为一中相对分子质量300-1000的人工合成的多*基多羧酸系列两性化合物的复杂混合物。
溶度:为40%的溶液
用途:用于生物大分子蛋白质和酶的等电聚焦电泳
储存:充氮密封4℃保存。保持期,两年。开启后请尽快用完。
·Western blotting检测试剂盒(ECL发光)
编号:XH078
规格:10T
试剂盒内容:
1. 封闭试剂:30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白,缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液,50ml。
3. HRP标记二抗,0.1ml,效价1:2000-5000。
4. ECL显色液,25mlA+25mlB。
试剂盒原理:
SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,加入发光底物后,能让胶片感光。最后经显影和定影后,可以在胶片上显示出条带来(抗原所在位置)。
操作步骤:
常规电泳转膜后,
1. 清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。
2. 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜,封闭液内,摇床震动,室温封闭30min。用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min。
3. 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水,混匀,可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4. 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。
5. 用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min。
6. 用稀释好的抗体稀释液稀释二抗。根据用量,按10ml抗体稀释液加入5ulHRP标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7. 用TBS-T ,PH7.6洗液,室温漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL发光液:根据用量,取ECL发光液A、ECL发光液B各等量,混匀,加在膜正面,暗室显色5分种。先倾去显色液,再小心用纸吸去显色液,在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片,做好标记,轻轻的放在膜上,请小心不要错动(余下的胶片请收好)。显色30S到1分种,取出(直接上抬)胶片立即完全浸入显影液中1-2min,再丢入定影液中1分钟,离开暗室,观察结果,根据条带强弱,可再次感光一次,并且减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项:
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。而不是标本来源来洗择。因为二抗是与一抗反应而不是与标本反应。
2. western blotting ECL发光法操作比较烦琐,但其敏感性较高,对于低丰度蛋白也能显示出结果。
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱,可增加抗体浓度,延长抗体孵育时间,加长感光时间。
4. TBS-T(0.01M)配制方法:称取NaCl 8.5g ,Tris 1.21g ,用800ml的双蒸水溶解,用盐*(代"酸")调PH到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用双蒸水 加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
如果实验结果无条带,可将稀释过的一抗再作1倍,10倍,50倍稀释,直接点到膜上(10ul),封闭,加二抗,最后显色,如果能显出斑点来,则证明显色系统没有问题,可从蛋白裂解和一抗上面找原因;如果无法显出,请先从显色系统寻找原因。
BCA蛋白浓度测定试剂盒优惠促销关键词:百奥莱博,BCA蛋白浓度测定试剂盒,XH062
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60-00-4 乙二*(代"胺")四乙酸 EDTA FREE ACLD
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95-54-*(代"5") 邻*二胺(OPD)
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