北京2×Pfu PCR MasterMix (含染料)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京2×Pfu PCR MasterMix (含染料)品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京2×Pfu PCR MasterMix (含染料)品牌
品牌：百奥莱博
规格：1ml/10ml
编号：XH033
产地：国产|进口
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

想要了解更多关于北京2×Pfu PCR MasterMix (含染料)品牌的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·2×Taq PCR MasterMix (不含染料）
编号：XH032
规格：1ml/10ml
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

·去内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号：XH012
规格：50T/200T
原理简介
本试剂盒在常规质粒提取试剂盒的基础上改进而来，增加内毒素清步骤，提取的质粒可用于一些要求更高的实验，如转染。
本试剂盒（以200T为例）可以用200小次或者10大次提取。
注意事项
1．溶液Ⅱ低温时可能出现析出和沉淀，可以37度水浴几分钟即可恢复澄清透明。用完请及时盖紧盖子。
2．溶液Ⅰ中加入RNase 后请放2-8度保存，如果长久不用（如一个月），可-20度冻存，或者按照比较分次加入。
3．可根据实验情况中量或者大量提取，加入的试剂等比放大。
4．内毒素清除剂在常温下出现面混浊现象，为正常，在2-8℃放置一段时间混浊会消失。
5．本试剂盒在去除内毒素的过程中会损失少量质粒，因而相对于常规提取，本试剂盒得率偏低。
操作步骤(以小量提取为例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA，混匀，2－8度保存。
1．取过夜菌1-5毫升，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清（可重复多次收集于一管中，收集量可考虑菌液浓度与质粒拷贝数），如为阳性细菌，可加入100mg/ml的溶菌酶悬浮菌液，37度处理30分钟，离心，收集沉淀。
2．在收集的菌液中，加入200ul溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块(可vortex 5-10秒或更长时间)。室温放置2-3分钟。
3．每管加入200ul溶液Ⅱ（如有沉淀，可37度水浴），轻轻颠倒离心管4-6次，使细菌完全裂解，溶液透明。放置2-3分钟，不过超过5分钟。但也不要混匀后立刻加入溶液Ⅲ。
4．放置2-3分钟后，每管加入200ul溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。
5．最高速(13,000rpm左右)室温离心5分钟。
6．将上清转移到新的离心管中，如有沉淀，可再次离心。
7．加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊，冰浴2min至溶液变清亮。
8．37℃水浴2min，不时振荡，溶液又变浑浊。12000rpm室温离心2min，溶液应分为两相，上层水相含质粒DNA，下层油状相含内毒素。
9．将含质粒DNA的上层水相转移至新管，弃下层油状相，注意不要吸入油状相。重复抽提三次，即重复步骤7-9三次。
10．在得到的上清中加入等体积的结合液，再加入等体积的无水乙醇，混匀（上清：结合液：无水乙醇＝1：1：1）
11．玻璃奶摇匀。取20ul混匀的玻璃奶加入上面的混合液中，混匀。室温放置5分钟，期间颠倒2次。
12．10000转/分钟离心1分钟，倒掉上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
13．室温放置10分钟（如果为大提，请延长放置时间到30分钟，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入30－50ulTE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
14．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。


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·Pfu DNA Polymerase
编号：XH022
规格：500U/2500U
产品简介：
我们生产的Pfu DNA Ploymerase(高保真TAQ酶)是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为90kDa。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA扩增过程中产生的错配，而传统的Taq酶却不能，其它耐热DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等虽具有校正功能，但Pfu酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase中出错率最低的。Pfu酶无5’→3’核酸外切酶活性，PCR反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/分钟，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍保持90%以上的活性，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu酶的PCR产物为平末端，可加A处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。一般用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和末端补平等。
注意事项：
1、Pfu DNA Ploymerase应储存于-20℃，有效期12个月。
2、取Pfu DNA Ploymerase做PCR反应时，请用高压灭菌处理过的吸头。
3、用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm值在55-80℃之间，引物浓度在0.1-0.5uM之间，比Taq酶略高。

活性定义：
1单位(U) Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。


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·非变性细胞裂解缓冲液
编号：XH065
规格：100ml
非变性细胞裂解缓冲液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。
非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% NP-40以及2mM sodiu*(代"m") pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。储存条件：-20℃，有效期一年。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
关于裂解液的选择，一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异，选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P1001)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。

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