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- oneshine
- oneshineF0002
- 2026年05月21日
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7万元/株
一、原理
此系统包括lentiSAMv2质粒和lenti MS2-P65-HSF1_Hygro质粒。lentiSAMv2质粒如图一所示，其中，eSpcas9(1.1)也叫做dCas9，是将Cas9酶切位点突变后形成的，它只具有结合基因组和sgRNA的能力，而不具备切割DNA的能力。lentiSAMv2质粒的sgRNA经过改造，在sgRNA后面加入了19个碱基（MS2 binding site）。这19个碱基经过转录后形成一个具有茎环结构的RNA，此RNA能特异性地与MS2蛋白结合。而在另一个载体lenti MS2-P65-HSF1_Hygro质粒上，MS2蛋白已经与P65、HSF1蛋白融合。其中，P65、HSF1是两个转录因子。因此，当两个载体同时进入同一个细胞后，lentiSAMv2质粒表达“sgRNA- MS2 binding site“融合RNA及dCas9蛋白，lenti MS2-P65-HSF1_Hygro载体表达MS2-P65-HSF1融合蛋白。在dCas9作用下，则形成“基因组DNA-dCas9-sgRNA-MS2 binding site-MS2- P65-HSF1”这一超级复合体。当sgRNA为转录起始位点时，此超级复合体定位于转录起始位点，由于P65、HSF1可以募集更多转录因子，因此可启动转录，从而激活转录起始位点后面的基因表达。
我们合成了7万多个转录起始位点的sgRNA（对应2万多个基因），分别载入lentiSAMv2质粒中，再把此7万多个质粒混合起来，形成文库。并且我们将此文库整合到了细胞中，一个125cm2细胞培养瓶中含有约108个细胞，每个细胞被激活一个基因，共约2万个基因被激活，所以含有每个特定激活基因的细胞约有5000个（108/2万）。
二、参数
靶基因物种：人
靶基因数目：23,430
gRNA数目：70,290
细胞类型：胃癌、乳腺癌、结肠癌等癌细胞系和永生化的细胞系。
价格：7万元/株
三、应用
【应用举例：细胞凋亡相关基因筛选】
取细胞文库进行扩增，然后平均分成两份，每一份包含108个细胞，每个细胞被激活了一个基因，共约2万个基因被激活，所以含有每个特定激活基因的细胞约有5000个（108/2万）。向其中一份细胞中加入放线菌素D、诱导细胞凋亡（A组），在另一份细胞中加入溶剂、作为对照（B组）。A组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞A1、未凋亡细胞A2。B组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞B1、未凋亡细胞B2。分别对A1、A2、B1、B2进行短测序，检测哪些基因被激活了。A2中被激活的细胞即为能抵抗凋亡的基因，B1中被激活的基因即为能诱导凋亡的基因。其它应用：
（1）新药靶点确定与验证
（2）环状RNA上游调控机制分析、下游调控机理分析
（3）Long noncoding RNA作用机制验证
（4）脂肪代谢机制研究
（5）干细胞自我更新、不对称性分裂机制等。
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文献和实验CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研究及药物研发等方面发挥重要的功能。 CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选流程
动物模型构建CRISPR-Cas9 系统作为最新一代基因编辑技术，能够简便高效地实现基因组精确 修饰，是制备哺乳动物疾病模型的重要工具。目前科学家利用 CRISPR-Cas9 技术在动物模型，如小鼠、大鼠、猪 和猴等研制方面做出一系列重要工作。如科学家们将 CRISPR-Cas9 系统导入小鼠受精卵，成功获得了有特定基因突变的小鼠模型，并获得近乎 100% 的基因靶向突变效率，极大地降低了基因编辑小鼠模型制备的难度和成本，有望被广泛应用。背景：使用自主研发的sgRNA设计平台为一个基因位点设计
CRISPR/Cas9文库2.0升级版—助你快速、精准地做基因筛选
Cas9蛋白是一种以RNA为导向的DNA内切酶，是一种操纵基因组的强大工具[1]。更多的研究者获益于基于CRISPR的遗传筛查，对已确定的基因有更多基因功能表型的认识[2]。早在2013年，海外的两个研究团队分别在Science杂志同一期上发表了CRISPR文库的相关研究[3,4]。这是首次关于CRISPR文库的研究，显示出比shRNA文库更有效的筛选效果。但在文库设计初始，对sgRNA活性规则知之甚少，而非活性和非特异性的sgRNA会降低文库有效基因的覆盖率及靶基因的准确
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