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- ATCC
- 美国
- ATCC-902
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 肿瘤类型：
见说明书
- 细胞类型：
科研
- ATCC Number：
见说明书
- 品系：
细胞系
- 组织来源：
见说明书
- 相关疾病：
见说明书
- 物种来源：
小鼠
- 免疫类型：
见说明书
- 细胞形态：
正常
- 是否是肿瘤细胞：
见说明书
- 器官来源：
见说明书
- 运输方式：
干冰或常温运输
- 年限：
代数：3-4代
- 生长状态：
贴壁
- 规格：
T25
PG13逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞介绍：
| 英文名称 | PG13 |
| 中文名称 | 逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞 |
| 动物种属 | 小鼠 |
| 规格 | 贴壁细胞：T25细胞培养瓶；悬浮细胞：15mL离心管 |
| 运输方式 | 复苏细胞常温运输，冻存细胞干冰运输 |
| 细胞类型 | 科研 |
传代前准备--胰蛋白酶消化--吹打分散细胞--分装稀释细胞--继续培养
1) 将培养瓶内旧的培养液弃掉, 然后用D-Hanks液洗两次,(一定要洗干净,以免影响胰酶的消化作用)。
2) 加入0.25%胰酶-EDTA消化,25cm培养瓶加0.4ml, 37度消化5min,镜下看到细胞变圆,间隙增大。
3)立即加含10%FCS的培养液终止消化,用细胞刮刀轻刮,注意,这时候用吸管吹不下来,但是刮刀却很容易刮下来,而且对细胞的损伤极小。
4)离心,弃上清,加新的培养液(10%FCS),小心吹匀,分装入新的培养瓶。
传代PG13逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞培养注意事项：
1、不要轻易改变培养液，我曾经把MEM换成1640后，细胞传几代后莫名其妙死亡。
2、如果想节省消化液，上面第2步可换成3-5mlDPBS洗，主要是去除培养瓶里会影响消化液作用的成分。
3、自配消化液一定要调PH（=7.8-8）值，并且注意分装，-20度保存，避免反复冻融，用前37度预热，消化较好较快。
4.严格的无菌操作
5.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。
PG13逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二钠）消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g， KCl 0.20g， KH2PO4 0.02g， 葡萄糖 2.00g，0.5％酚红4ml，加入蒸馏水定容至1000ml。10磅20min高压灭菌，使用时调节PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培养瓶要彻底清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。
售后服务告知书
一、 收到细胞处理方法
1、 收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。
2、 收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费重发一次细胞。
3、 收到细胞后，可将培养瓶里多余的培养基收集放置于4℃备用。刚开始培养时，建议用瓶内的培养基，可补加2%的血清，待细胞状态恢复后，培养液一半用瓶内的，一半用客户自备的，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
二、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1、 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2、 细胞污染问题，请在收到产品24小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
3、 常温发货的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
4、 干冰冻存发货的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
5、 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
6、 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果（用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），核实后予重发；
7、 视具体情况而定。
三、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
1、 客户操作造成细胞污染，不重发；
2、 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；
3、 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
4、 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发；
5、 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；
6、 细胞收到2天内，未告知的，不重发；
7、 视具体情况而定。
四、其他服务政策
1、 细胞出现问题后，未能及时反馈并提交细胞质量问题反馈表的，不能免费重发，如需重发，客户需支付购买价7.0折的费用。
2、 如客户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司可以7.0折优惠价重新提供该细胞株。
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文献和实验NIH3T3细胞中本身是没有TK的，1981年Scolnick利用lambda载体把胸腺嘧啶激酶（TK）转入NIH3T3细胞，构建成NIH3T3 TK细胞，所以细胞分为NIH3T3 TK＋和NIH3T3 TK-两种细胞，在Scolnick认为NIH3T3就是NIH3T3（TK－）。 他做转染细胞的基础是基于1969年Todaro的实验。 具体内容参看建株文献：J Virol.1981 September； 39（3）： 935–944
RCR 实验，就是检测逆转录病毒的可复制性。刚开始由同事负责这个实验，结果一直问题不断，后来由我接手，从失败到成功，历时两个月，感触颇深！我们检测的是 GALV（gibbon ape leukemia virus）病毒的可复制性，根据现有 paper 中的做法，一是通过 qPCR 检测 GALV 病毒某段特定序列，二是 PG4 细胞空斑实验。1 qPCR 方法根据论文中的引物序列我们合成了引物，然后通过 SYBR 法来检测目的基因。一个很简单的 qPCR，看似一切都很正常，然而后续问题却接连
、PG13、DA、CFA(第三代包装细胞)，包装细胞可提供逆转录病毒gag、pol和env蛋白才能使带有包装信号及目的基因的病毒载体RNA进行包装，包装细胞只提供gag、pol和env蛋白而不产生具有复制能力的野生型病毒(RCR)，而第一代包装细胞可产生 RCR，安全性较差；第二代包装细胞，临床上已广泛应用，也未发现产生RCR，安全性好；第三代包装细胞更加安全，第三代包装细胞中主要区别是病毒结构基因中env不同。 反转录病毒作为基因转移的载体有如下特点：①反转录病毒感染细胞的效率高，基因
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