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预混合电泳样品和制胶缓冲液
预混合样品缓冲液能简化操作,使您的电泳标准化。浓缩配方使这些缓冲液可配合液体或冻干样品使用。所有预混合样品缓冲液都经过测试,保证质量和均一性。
| 缓冲液 | 1x 配方 | 应用 |
| Laemmli 样品缓冲液 | 62.5 mM Tris-HCI, pH 6.8, 2% SDS, 25% 甘油, 0.01% 溴酚蓝 |
SDS-PAGE |
| Native 样品缓冲液 | 62.5 mM Tris-HCI, pH 6.8, 40% 甘油, 0.01% 溴酚蓝 |
Native PAGE |
| Tricine 样品缓冲液 | 200 mM Tris-HCI, pH 6.8, 2% SDS, 40% 甘油, 0.04% 考马斯亮蓝G-250 |
多肽和小蛋白 SDS-PAGE |
| TBE- 尿素样品缓冲液 | 89 mM Tris-HCI, pH 8.0, 89 mM 硼酸, 2 mM EDTA, 7 尿素, 12% Ficoll, 0.01% 溴酚蓝 0.02% 二甲苯青FF |
变性ssDNA, RNA |
| IEF 样品缓冲液 | 50% 甘油 | 等电聚焦 |
| 酶谱样品缓冲液 | 62.5 mM Tris-HCI, pH 6.8, 25% 甘油, 4% SDS, 0.01% 溴酚蓝 |
蛋白酶分析 |
| 核酸样品缓冲液 | 50 mM Tris-HCI, pH 8.0, 25% 甘油, 5 mM EDTA, 0.2% 溴酚蓝, 0.2% 二甲苯青FF |
非变性dsDNA, TBE 凝胶 |
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文献和实验后,小心取出梳子。将稀释10倍的电极缓冲液倒入两槽中,前槽(短板侧)缓冲液要求没过样品槽,后槽(长板侧)缓冲液要求没过电极,备用。 4.样品的制备 称取小麦幼苗茎部0.5g,放入研钵内,加pH8.0提取液1ml,于冰水浴中研成匀浆,然后以2ml提取液分几次洗入离心管,在高速离心机上以8000r/min离心10min,倒出上清液,以等量40%蔗糖及1/5体积溴酚蓝指示剂混和,留作点样用。 5.点样 用微量注射器(50μl)吸取少量样液,在浓缩胶上层点样,每个点样槽15~50μl。点样时须小心
程度),可以根据样品的稳定性选择相应的缓冲液,非常适合对 pH 变化、金属离子或辅助因子浓度以及大环境情况敏感的生物分子 对装柱效果要求较高,一般推荐使用预装柱 上样体积一般为特定比例的柱体积,上样体积相对受限 基本步骤 凝胶过滤层析为非吸附性层析,实验步骤主要包括平衡、上样、洗脱三步(图8)。 1.平衡:使用相应的缓冲液冲洗层析柱,使层析柱平衡至所需的实验条件中。 2.上样:将合适体积的样品通过样品环等容器加入层析柱中。 3.洗脱:使用平衡缓冲液冲洗层析柱,使加入层析柱的样品逐渐被分开
没有太多要求,任何层析都可以无缝衔接。 我们来看个具体晋级路线帮助增强自信。从微生物提取胰凝乳蛋白酶α-chymotrypsin。 α-Chymotrypsin 属于丝氨酸蛋白酶的一种,在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的羧基处水解肽键。 表1. α-Chymotrypsin参数和对纯化设计影响表 样品前处理使用超声方法进行菌体破碎,然后提取胞内总蛋白至合适 pH 值的缓冲液中,蛋白酶较不稳定,应同时考虑纯度和蛋白回收率之间的平衡关系。 图3. 样品处理流程图 纯化策略设计为: pl
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