G250蛋白快速染色试剂优惠价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

G250蛋白快速染色试剂优惠价是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多G250蛋白快速染色试剂等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：G250蛋白快速染色试剂优惠价
编号：WE0290
产地：国产|进口
规格：250ml
英文名：ShowProtein-G250 Protein Stain Reagent
  该产品是以考马斯亮蓝G-250染料为基础，应用于SDS-PAGE凝胶的快速蛋白染色试剂。灵敏度高，最低可检测到20ng蛋白。染色过程简单，快速，无需孵育，染色后直接水洗，即可产生清晰背景。

注意事项：
1、若要获得最佳的脱色效果，可多次重复脱色步骤或在去离子水中脱色过夜。
2、将凝胶加入染色液后加热至沸腾，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果。
3、本产品可重复使用2-3次，染色效果会随使用次数增加有所减弱。
4、本产品有轻微腐蚀性，请带手套操作。

操作步骤：
1、将电泳后的 PAGE 胶取出放入容器中，加入适量纯水(以充分覆盖PAGE 胶为宜)，加热至沸腾后停止，弃去液体。
2、加入适量快速染色液(液面覆盖凝胶即可)，加热至沸腾后停止，弃去染色液。
3、加入适量蒸馏水，加热至沸腾后停止，倾去蒸馏水，重复此步骤脱色至背景清晰。

实验图例

使用ShowProtein-G250蛋白快速染色试剂对SDS-PAGE染色后，不同浓度蛋白染色结果

储存条件：-20℃


欲咨询购买G250蛋白快速染色试剂优惠价，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·抗His标签多克隆抗体
编号：WE0351
英文名称：Anti His-Tag Rabbit Polyclonal Antibody
规格：20μl|100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端和内部的六个连续组*酸标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的His-Tag融合蛋白。

抗体类型：亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)

·Babuddy超保真DNA聚合酶
编号：WE0109
英文名称：Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
规格：100U
  Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase，其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30 sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20kb。

  本产品中包含两种PCR缓冲液，经过优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂DMSO使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。

  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。

产品特点
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

 

组份	20μl×250次(100 U)
Babuddy DNA Polymerase，2U/μl	50μl
5×Babuddy HF Buffer	1.5ml
5×Babuddy GC Buffer	1.5ml
100% DMSO	0.5ml
50 mM MgCl2	1.5ml

注意：本产品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM*离子。

活性定义：
在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、核酸内切酶活性检测：50μl反应体系中，10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19质粒于37℃温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
2、7.5 kb基因组DNA PCR扩增：50μl反应体系，1×Babuddy HF Buffer，50ng基因组DNA，1 U Babuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR扩增：50μl反应体系，5×Babuddy HF Buffer，10ng λDNA，1 UBabuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
5×Babuddy HF Buffer	4μl	10μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	1.6μl	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
100% DMSO	0.6μl	1.5μl	3%
Babuddy DNA Polymerase	0.2 μ	l 0.5μl	1 U/50μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

注意：
1)对于复杂模板或高GC含量的模板，请使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可选步骤：对于复杂模板，如高GC含量、带有复杂二级结构的序列，可加入本产品中提供的100%DMSO或其他PCR添加物，以提高扩增效率，推荐终浓度为3%，也可按照2%的浓度递增优化。由于DMSO可以降低引物的Tm值，因此若DMSO使用浓度很高，需降低退火温度。

a.模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
c.*离子：*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已经含有7.5 mM*离子，可根据dNTP浓度、引物和模板来调整，由此优化反应体系。若引物或模板中有螯合剂(如EDTA)存在，则应提高*离子浓度。若需要对*离子浓度进行优化时，可使用本产品中提供的MgCl2按照0.5 mM浓度梯度逐步调整。
d.dNTPs：反应体系中dNTPs的浓度一般为每种200μM，使用本品时，不推荐使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的浓度：Babuddy酶推荐的使用浓度为1 U/50μl 反应体系，可在0.5-2 U/50μl 反应体系之间优化酶的浓度。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·抗HA标签单克隆抗体
编号：WE0349
英文名称：Anti HA-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的HA标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的HA-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成流感病毒血凝素多肽(YPYDVPDYA)
应用范围：
WB(1：500-5000)
ELISA(1：200-20000)
IP(2 µg-5 µg)

·Taq酶抗体
编号：WE0121
英文名称：Taq Antibody
规格：500U|2500U
  本品是抗Taq酶鼠单克隆抗体，适用于Hot Start PCR。Taq Antibody与Taq酶结合后能抑制DNA聚合酶活性，进而能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq Antibody在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。因此无需对Taq酶抗体进行特殊失活处理。

产品特点;
1、在37℃，可抑制>95%的聚合酶活性。
2、可提高PCR反应的特异性和灵敏性，包括复杂的人基因组DNA或cDNA模板，低拷贝的模板，多重PCR等。
3、PCR反应速度快于普通化学修饰的聚合酶。

活性定义：Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合，25℃孵育15 min后，将在37℃，30 min条件下抑制97%以上的1 U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

使用方法：
将Taq DNA Polymerase和Taq Antibody等体积混合，20-25℃下放置15 min冰上待用。

注意：通过实验，我们建议Taq Antibody和 Taq DNA Polymerase混合的分子数之比为13:1较为合适，实际操作中由于引物、目的产物或Taq DNA Polymerase不同，可以摸索一系列的比例以得到最合适的结果。

以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增300 bp的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系
10×PCR Buffer	5μl
dNTP Mix，10μM each	1μl
Forward Primer，10μM	1μl
Reverse Primer，10μM	1μl
Template DNA	4μl
Taq酶和抗体的混合液	0.36μl
ddH2O	up to 50μl

2、PCR反应条件，可以按照各种PCR用DNA Polymerase的常规PCR反应条件进行PCR反应。

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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