北京现货cDNA第一链合成试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货cDNA第一链合成试剂盒厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：cDNA第一链合成试剂盒
编号：WE0132
品牌：百奥莱博
规格：100次
产地：国产|进口
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中使用的BalbScript逆转录酶是M-MLV由来的新型高效逆转录酶，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。点突变消除RNase H活性，酶的延伸性能提高，有效改善逆转录酶与RNA模板的亲和力，可获得长至12 kb的cDNA。精心优化的RT Buffer使逆转录酶应用范围更广，对后续的PCR以及定量PCR实验兼容性高。该试剂盒配备所有逆转录试剂，使用简单方便。适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR，以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

 

组份	100次
BalbScript，200 U/μl	25μl
5×RT Buffer	120μl
Primer Mix	60μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	120μl
DTT，0.1 M	60μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点
1、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。
2、良好的延伸能力：点突变消除RNase H活性，改善逆转录酶与RNA模板的亲和力，可获得长至12 kb的cDNA。
3、灵敏度高：可利用pg级的总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、使用方便：逆转录试剂盒中已配备所有逆转录试剂，仅需准备模板即可轻松完成逆转录。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

操作步骤：
注意：1ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、BalbScript和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
BalbScript，200 U /μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
5、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
6、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、BalbScript和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
RNase-Free Water	up to 13μl

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
BalbScript(200 U/μl)	1μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6、进行cDNA第一链合成：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，50℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，50℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，加入量应小于PCR反应体系的1/10，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。
关键词：WE0132,cDNA第一链合成试剂盒,BalbScript cDNA Synthesis Kit


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编号	名称
WE0310	TBST(pH8.0,10×)
WE0324	BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)
WE0184	唾液基因组DNA提取试剂盒
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WE0213	DNase I(不含RNase)
WE0371	生物素化驴抗人IgG(H+L)
WE0248	DNA快速连接试剂盒
WE0149	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
WE0182	水产动物基因组提取试剂盒
WE0199	细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0124	高效多重PCR Mix
WE0265	细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
WE0323	DAB显色试剂盒(WB IHC)
WE0267	His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)
WE0181	酵母基因组DNA提取试剂盒
WE0350	抗HA标签多克隆抗体
WE0245	1kb DNA Ladder
WE0357	抗GAPDH多克隆抗体
WE0251	TOP10感受态细胞
WE0206	磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
WE0271	Protein A琼脂糖凝胶
WE0164	高纯质粒大提试剂盒
WE0232	Y染色体人基因组DNA定量试剂盒
WE0127	全血Taq DNA聚合酶
WE0214	溶菌酶
WE0201	血清血浆尿液游离RNA提取试剂
WE0337	抗Flag标签单克隆抗体
WE0276	BCA蛋白定量试剂盒
WE0321	一抗稀释液(WB IHC)
WE0135	SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)
WE0361	生物素标记驴抗小鼠IgG(H+L)
WE0402	唾液DNA样本保存管
WE0160	超纯dNTP混合液(10 mM)
WE0312	PBS(pH7.5,10×)
WE0397	游离DNA样本保存管(5ml,PET)