MMLV逆转录酶

MMLV逆转录酶产品及特点：

该酶是突变型的MML V逆转录D N A聚合酶，从表达M o l o n e y Mu r i n eLeukemia Virus（莫洛尼氏鼠白血病病毒）reverse transcriptase基因（pol基因）的E.coli 细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1 KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA：RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。该酶浓度为200 U/ mL。

1. 延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的full-length cDNA。

2. 最佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。

3. 能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。

4. 可用于first strand cDNA合成，second strand cDNA 合成，DNAlabeling，RNA primer extension等。

5. 与PCR兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。

6. 能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺抑制。

MMLV逆转录酶质检标准

无endodeoxyribonucleases，exodeoxyribonucleases，phosphatasesand ribonucleases污染。SDS-PAGE下呈单一带，纯度>99%。

活性单位定义

以poly（rA）为模板，以oligo(dT)12-18为引物，在37℃温度下，在10分钟将1 nmol 的 dTMP 掺入到多核苷酸中所需酶量为一个单位。酶反应条件为: 50 mMTris-HCl（pH 8.3），6 mM MgCl2，10 mM DTT，40 mM KCl，0.5 mMdTTP，0.4 MBq/mL [3H]-dTTP，0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

Buffer成分

储存Buffer：50 mM Tris-HCl（pH 8.3），0.1 M NaCl，1 mM EDTA，5mM DTT，0.1%（v/v）Triton X-100 和 50%（v/v）glycerol。反应Buffer，5×：250 mM Tris-HCl(pH 8.3 at 25℃)，250 mM KCl，20 mM MgCl2，50mM DTT。