T4 DNA 聚合酶

T4 DNA 聚合酶产品及特点：

在模板及引物存在的条件下，催化与模板互补的脱氧核苷酸依次选择性地连接在引物的3′-OH末端上的反应。本酶还具有单链DNA特异性的3′→5′核酸外切酶活性，该活性比Klenow Fragment强100～1,000倍，也作用于双链DNA，在dNTP存在条件下表现出聚合酶活性，当dNTP用尽时转为3′→5′核酸外切酶的活性。本酶不含 5′→3′的核酸外切酶活性。 此产品特点是：

1. 利用较强的 3′→5′的核酸外切酶活性，通过置换合成（Replacementsynthesis）从 DN**段的 3’末端进行标记。

2. DNA末端的平滑化。

3. 通过引物伸长法解析mRNA转录的起始点。

活性单位定义

以热变性小牛胸腺 DNA 为模板/引物，在３7℃、pH8.8 的条件下，30分钟内使10 nmol全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（Ｕ）。

纯度2 U的本酶和1 μg的Closed circular（RFI）pBR322 DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

T4 DNA 聚合酶备注

1. 本酶的最适 pH为 8～9，在 pH7.5及 pH9.7时活性约为50%。

2. 活性的表达需要Mg2+的存在。为了获得最大活性，还需要SH基的还原剂存在。

3. 整个反应体系中的离子强度超过100 mM时活性将被抑制。

4. 本酶易受模板 DNA 高级结构的影响，T4 gene 32 产物可以显著提高聚合酶活性，而 3′→5′的核酸外切酶活性则完全被抑制。

5. 在 10×反应缓冲液中直接加入 0.1% BSA 时会产生大量白色沉淀，因此在调制反应液时请按下列顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。