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乔羽
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5μg
名称:pUC19载体,大肠系列质粒
供应商:上海乔羽
适用范围:仅限科研实验,不作临床
用途:克隆外源基因。
产地:国产|进口
规格:5μg
浓度:250~1,000μg/ml
贮存溶液:Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM EDTA 1mM
载体类型: 克隆载体
细菌抗性: 氨苄青霉素
链长:2686 bp
pUC19载体,大肠系列质粒用途:
(1)克隆外源基因。
(2)利用lac promoter进行基因表达。
(3)使用M13 Primers进行DNA测序。
pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点,因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如:JM109等) 进行转化后,在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时,可以很容易地通过蓝白筛选,判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因,对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时,可以方便地使用M13系列的通用引物。
pUC19与pUC18的区别及共同点:
这两个质粒的结构几乎是完全一样的,只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因,因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列,在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后,可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。
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文献和实验需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上,或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒,一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源:QIAGEN 凯杰
相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC18 和 pUC19质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是最常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA 片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。 这两个质粒的结构几乎是完全
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer ( 10 μM 1-5 μL 下游 Primer ( 10 μM ) 1-5 μL 模板 lamid DNA ~ 50 ng genomic DNA ~ 1000 ng cDNA ~ 500 ng 粗提液 ~ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例: 一、plasmid DNA 扩增 1.提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100,250,500
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