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文献和实验BSA 蛋白标准液、BCA 试剂、PBS。 1) 标准曲线:用 BSA 和 PBS 混合总体积为 20 μL 的溶液做标准曲线,具体操作如下:按照 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 含量稀释 BSA 蛋白标准品,每个浓度(0、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μLBSA,其余用 PBS 补齐至 20 μL)梯度做一个复孔。 2) 样品稀释测蛋白浓度:10 倍稀释法:取 18 μLPBS+2 μL 样品上清(经上步处理的样品 12000 r/min 离心 5 min
Western blot 实验技巧精要 ——轻松获得高质量 western blot 条带图 Western blot 方法在 SCI 文章中出现的频率非常高,漂亮的 WB 电泳图可以给文章增色不少。但是 WB 实验的步骤琐碎,细节颇多,要想得到令人满意的结果还是需要花费很多时间和精力去摸索实验技巧的。 小编经过了一段时间的努力,已经可以比较轻松的实现用 WB 方法对磷酸化蛋白计算药物的 IC50 值(见下图)。 接下来,小编将结合自己的经验以及网上可以搜索
llh刘丽华 各位好:我做了1个多月western blot了,内参跑得还可以,但是目的蛋白总是跑不好,今天跑出来非特异性条带很清楚,而目的条带却很淡,不知是什么原因!前一次也是这种情况,我就延长封闭时间至2h,一抗1:700,二抗1:5000,请各位高手帮忙分析一下吧!下面是我的图片,最下面,模糊的一条(靠图片中间的一条)是我的目的条带! coffeeshine 如果非特异带很清楚,延长封闭时间没作用
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