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上海研谨生物
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500ml
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文献和实验外周血DNA为模板,PCR扩增凝血因子FⅧ基因的583bp特异片段产物,其中包含MspⅠRFLP多态位点,经MspⅠ酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测等位片段的长度(583 bp或360 bp+223 bp),以此为遗传标记进行连锁分析,判断胎儿是否得到了带有缺陷FⅧ基因的染色体,从而做出间接基因诊断。 二、材料及试剂 1. DNA(50ng/μl)、引物Ⅰ和Ⅱ(20 μΜ)、TaqDNA聚合酶(5 U/μl)10×PCR反应缓冲液、 dNTP(2.5 mM)、灭菌蒸馏水、液体石蜡、限制性内切酶MspⅠ
×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l取5ul用来测量以后,剩余样品RNA为35 ?l,剩余RNA总量为:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g②纯度检测RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度,比值范围1.8到2.1。2)变性琼脂糖凝胶电泳测定①制胶1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。10×MOPS电泳缓冲液浓度 成分0.4M MOPS
酶 5. 琼脂糖 6. DNA Marker 7. tip 8.eppendorf管 9. 微量移液器 附试剂的配制: 1. 10×PCR缓冲液 500mmol/L KCl 100mmol/L Tris·HCl(Ph8.3,室温) 15mmol/L MgCl2 0.1% 明胶 2. 4×dNTP 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP
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