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- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃,避光
- 保质期：
12 个月
- 库存：
大量供应
- 供应商：
上海研谨生物
- 规格：
50T
产品简介：
神经 HRP 示踪显色液(TMB 法)溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，不适量过氧*化脲或双*氧水不缓冲液混 匀后，不过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察，在辣根过氧化物酶的催化下 , TMB 会产生蓝色沉淀，该沉淀不溶于水和乙醇，显色后呈蓝色，可在显微镜下观察。
神经 HRP 示踪显色液(TMB 法)是动物经麻醉、注入 HRP 后，游离或络合型的 HRP 不氧化剂反应生成络合物，该络合物氧化供氢的 TMB 显色剂，呈蓝色，在显微镜下清晰可见，该检测法较 DAB 法灵敏。该显色液仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
| 货号 | 品牌/规格/主要参数 | 市场价 | 货期 | |
| R20631-50T | 神经HRP示踪显色液(TMB法) | ￥460.00元 | 2-3天 | |
| R20632-50T | 神经HRP示踪显色液(DAB法) | ￥460.00元 | 1-2周 |
| 产品组成 | ||
50T |
||
| 试剂(A): TMB assay buffer | 2×500ml | RT 避 光 |
| 试剂(B): TMB 显色液 | 30ml | -20℃ 避 光 |
| 试剂(C): TMB 增强剂 | 2×1ml | RT |
| 试剂(D): TMB Wash buffer(20×) | 100ml | RT |
操作步骤(仅供参考)：
(一)、准备工作
1、动物麻醉：多用(3.5%)戊巴比托妥钠作为麻醉剂，大鼠的麻醉剂量为 0.25-0.35ml/100g。2、导入 HRP：有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。
3、确定动物存活期。
4、动物灌注：麻醉后，经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。先用生理盐水或 PBS 快速灌注。随后用 4%的多聚*甲醛固定液灌注，先快后慢，时间控制在 30-40min。最后用 10% 蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)。
5、取材：取组织置于 20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中，切片厚度 40μm，存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。
(二)、显色反应
1、配制 TMB 孵育液：取适量的 TMB assay buffer 和 TMB 显色液，按 TMB assay buffer： TMB 显色液=39:1 的比例混合，即为 TMB 孵育液，即配即用，不宜保存。
2、配制 TMB 显色工作液：取适量的 TMB 孵育液和 TMB 增强剂，按 TMB 孵育液：TMB 增强剂=2000～8000：1 的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定)，即为 TMB 显色工作液，即配即用，不宜保存。
3、配制 1×TMB Wash buffer：取适量的 TMB Wash buffer(20×)，按 TMB Wash buffer： 蒸馏水=1:19 的比例混合，即为 1×TMB Wash buffer。室温保存，6 月有效。
4、切片用蒸馏水清洗 3 次，每次 2min。
5、切片入 10ml TMB 孵育液(提前 20℃温育)，避光孵育 20min，其间不断晃动。
6、切片入 10ml TMB 显色工作液(提前 20℃温育)，避光孵育 20min，其间不断晃动。7、漂洗：取 10ml 左右的 1×TMB Wash buffer 漂洗切片 2-3 次，每次 5min。
8、贴片，载玻片用铬明矾明胶包被，室温空气干燥。
9、脱水、透明步骤按如下操作：
①蒸馏水 10s
②70%乙醇 10s
③95%乙醇 10s
④100%乙醇 2 次，每次 10s
⑤二甲苯 2 次，每次 2～5min。
- 中性树胶封片，显微镜下观察蓝色反应。
注意事项：
1、如果出现高的反应背景或沉淀，表明 TMB底物反应过于强烈。
2、所用器皿必须洁净，避免含有氧化剂或还原剂，否则会产生非特异性反应。
3、TMB显色液避免反复冻融，以免显色效率下降。
4、TMB增强剂注意密闭保存，否则显色效率下降。
有效期： 12 个月内有效。
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文献和实验过氧化物酶 TMB 法 TMB法：原理同DAB法，但反应产物呈深蓝色沉淀。 1)孵育液配制 A液：亚硝基铁氰化钠(硝普钠) 100mg H2 0 92．5ml 0．2mol/L醋酸缓冲液(pH 3．3) 5ml B液：TMB 5mg 无水乙醇 2～4ml 临用前将A液和B液混合即为预
High-Throughput Tetramethylbenzidine (TMB) Screen for Peroxidases
Peroxidases catalyze the decomposition of hydrogen peroxide coupled to the oxidation of a variety of organic and inorganic substrates. Produced by a broad variety of natural sources, most peroxidases use heme or vanadium as a cofactor
因为要用神经逆行示踪剂，文献中提到比较多是固蓝，英文名字fast blue，于是就购买了，但不是我经手买的，买的是fast blue bb salt，和另外一种示踪剂碳化青（DiI），一同使用。使用中发现，后者很好溶解，用来标示神经效果很好，但是这个固蓝，一是溶解不了，用文章中提到的双蒸水、酒精、DMSO都不行，二是不能激发荧光，即使是新拿出来的颗粒，放在荧光显微镜下也是什么都没有。回头再查，发现，固蓝有很多种类，包括固蓝
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