乙醇福尔马林溶液

FFPE 样本前处理过程及注意事项

，也是最无法补救的一步。通常选用 10% 中性缓冲福尔马林 (ph 值 7.2-7.4) 进行固定，避免酸性或无缓冲福尔马林对核酸的降解。由于手术或活检组织很可能在手术过程中就已出现血氧供应不足，因此组织需要在离体后 30 min内尽快固定。 组织标本需要充分且适度的固定，固定不足导致深处组织未接触到福尔马林而出现核酸和蛋白质降解，过度固定又会导致组织内交联严重加大核酸提取难度。组织标本厚度、福尔马林溶液的体积、固定时间是影响固定程度的三个重要因素。 福尔马林大约以 2-3 mm/24 h 的速度穿透实体

TSA多重免疫荧光染色的实验步骤

实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原

不同样本破碎和匀浆中常见问题及解决方案

FFPE 样本 FFPE 样本中的核酸在进⼊福尔马林浸泡之前就开始发⽣降解；样品基质内核酸易发⽣⽚段化、核苷酸碱基修饰以及核酸与蛋⽩的交联。 解决方案 1. 使用厚度不超过 5 mm 的组织样本，组织固定前的操作时间应当越短越好，避免 RNA 降解。 2. 不要过度固定（最多 24 h），固定时间越长，交联程度越⼤，样本中的 RNA 降解越厉害。 3. 推荐使⽤中性的福尔马林缓冲溶液及优质试剂进行石蜡包埋，不含添加剂。 4. 尽可能避免样品染色。 5. 可考虑使用专门的环保型脱蜡液，降低对实验环境