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- HZbscience
- 中国/上海
- HZ120402-1
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输、-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
LIC Cloning Kit for PCR
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
1 ug盒
PCR专用LIC克隆套装产品及特点
LIC就是不依赖于连接的克隆技术（Ligation-Independent Cloning），它是继限制性内切酶切/连接酶克隆方法后出现的第二代DNA克隆技术，其原理如下:
它效率高，尤其适用于大规模分子克隆。本产品就是基于LIC原理开发的即用型克隆载体，它具有下列特点：
1. 操作简单，一管式一步反应，只需加入插入片段即可，客户不需要购买任何额外的酶。
2. 时间短，整个过程只要5分钟即可完成。
3. 高效，比常用的AT克隆效率更高，阳性率接近于100%。
4. 克隆方向和位置精准和可控，适合表达型克隆工作。
5. 便于自动化，适合高通量克隆。
6. 适用于长片段克隆。
PCR专用LIC克隆套装使用及效果
将PCR获得的插入片段纯化，然后将处理后的插入片段与LIC载体以及溶液A和溶液B加入同一反应管中退火形成环状分子，经转化进大肠杆菌后，细胞的修复系统修复这些突出和缺口而得到完整的重组质粒。
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文献和实验) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
引物二聚体形成的几率，但是为了下一步的操作就要作出适当的“牺牲”。 很多时候PCR只是初步克隆，之后我们还需要将目的片段亚克隆到各种载体上，那么就需要在PCR这个步骤为下一步的操作设计额外的碱基。以下总结一些为了亚克隆所要设计的序列。 （1）添加限制性内切酶酶切位点 添加酶切位点是将PCR产物进行亚克隆使用得最多的手段。一般酶切位点是六个碱基，另外在酶切位点的5’端还需要加2～3个保护碱基。但是不同的酶需要的保护碱基数目是不相同的，例如：SalⅠ不需要保护碱基，EcoRⅤ需要1个，NotⅠ
，但是为了下一步的操作就要作出适当的“牺牲”。 很多时候PCR只是初步克隆，之后我们还需要将目的片段亚克隆到各种载体上，那么就需要在PCR这个步骤为下一步的操作设计额外的碱基。以下总结一些为了亚克隆所要设计的序列。 a 添加限制性内切酶酶切位点 添加酶切位点是将PCR产物进行亚克隆使用得最多的手段。一般酶切位点是六个碱基，另外在酶切位点的5’端还需要加2～3个保护碱基。但是不同的酶需要的保护碱基数目是不相同的，例如：SalⅠ不需要保护碱基，EcoRⅤ需要1个，NotⅠ需要
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