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文献和实验CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具,今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作,仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒,如下图所示: 酶切系统 37 ℃, 3 hr;Run 1% gel,回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端,以利于下游 oligo 退火产物的连接;酶切时请充分,且绝对不能加 CIP 处理
「铲屎官」注意了!剑桥大学揭示这些基因的改变或让猫猫狗狗成为
细胞 iBMDM 和犬的巨噬样细胞 DH82。结果表明小鼠巨噬细胞感染 2 小时后开始裂解,而犬的巨噬样细胞经过 12 小时仍存活,表明犬的细胞对于鼠伤寒沙门菌的耐受性更高。接着,研究者在小鼠模型上通过 CRISPR-Cas9 技术构建了与 caspase-1/-4 融合蛋白催化作用相当的重组蛋白。小鼠细胞在脂多糖(LPS)刺激下很快裂解,而犬的巨噬样细胞对于 LPS 的刺激则无反应。进一步的体外实验表明,caspase-1/-4 融合蛋白能激活 IL-1β 并且同时切割消皮素 D。图片来源:Cell
by several of our MitoTracker and MitoFluor dyes ― MitoFluor Green (M7502), MitoFluor Red 589 (M22424), MitoTracker Red 580 (M22425) and MitoTracker Deep Red 633 (M22426). Mitochondrial uptake of nonyl acridine orange (NAO, A1372) and MitoTracker Green FM (M7514
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