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文献和实验之差,计算标本中待测抗原含量。 进行ELISA操作时应注意以下几点:①实验室温度应控制在18℃~25℃;②加样须准确,同一样本设立对照管、测定管各两孔,取其平均值;③严格控制温育反应温度及时间,洗涤应充分;④结果判定应以仪器为准,肉眼仅作参考。 二、免疫荧光技术 免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合,将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体-抗原复合
同时加在抗原标本切片上,经37℃孵育后,如发生抗原补体抗体反应,补体就结合在此复合物上,再用抗补体荧光抗体与结合的补体反应,形成抗原抗体―抗补体荧光抗体的复合物,此法优点是只需一种荧光抗体可适用于各种不同种属来源的第一抗体的标记显示。 四、双重免疫荧光标记法 在同一细胞组织标本上需要同时检查两种抗原时,要进行双重荧光染色,一般均采用直接法,将两种荧光抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合,加在标本上孵育后,按直接法洗去未结合的荧光抗体,抗A抗体用异硫氰酸荧光素标记,发黄绿色荧光;抗B抗体
33342染色,浓度为5~10mg/L ,室温下20分钟。 ②分析前切勿洗涤细胞。 Hoechst33342可用作细胞DNA的活体染料,据信可在保持细胞活性的同时,呈现出相当好的DNA化学计量关系,激发波在紫外范围350~363nm之间,发射波则在450nm处。 5、以异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyante FIFC)染色蛋白质。 (1)试剂:异硫氰酸荧光素(FIFC)用含40mg/L RNase的PBS配成0.1~1.0mg/L浓度。 (2)方法: ①染色前用终浓度
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