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文献和实验质。此外,该方法可用于稳定和瞬时表达,与其他化学方法不同,它可以实现动物和人体内 DNA 和 RNA 转移。阳离子脂质体介导的转染的主要缺点在于,其转染效率取决于细胞类型和培养状态,需要根据细胞类型和转染试剂优化转染条件。 图 1. 阳离子脂质体介导的输送机制 转染小贴士 2. 阳离子脂质体介导的工作流程 文章来源:赛默飞世尔科技
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。 三、实验材料与器材 1、材料 293T细胞 MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 DMEM培养基 链霉素/青霉素(双抗) FCS(小牛血清) PBS(磷酸盐缓冲溶液) 胰酶/EDTA消化液 转染试剂(TransFast2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头 酒精
酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象. RNA干扰实验 将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法(显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染
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