Origami B (DE3)化学感受态

Origami B (DE3)化学感受态
产品信息

货号	名称	产品形式	规格	储存
A0146	Origami B (DE3) Chemically Competent Cell	液体	100μl	-80℃

 

使用说明
1、本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。
2、取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化；
3、加入1μl纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30min；
4、将菌液放入42℃水浴中热激45sec，立即放入冰浴中2min；
5、加入900μl SOC/LB培养基，于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育；
6、将菌液5000rpm×5min离心，弃尽上清；
7、取100μl新鲜LB培养基将菌体打散，均匀涂布于对应抗性平板表面；
8、平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕，再倒置37℃培养过夜。

基因型
F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (Kan^R, Tet^R)

菌株介绍
Origami B系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于BL21的lacZY基因突变株。所以，Origami B系列感受态细胞是集合BL21，Tuner和Origami三种细胞株的优点于一身。
在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。
TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。
Origami B(DE3)感受态细胞来源于含有lacZY基因突变的BL21菌株，能够通过IPTG高效控制目的基因的表达。
形成二硫键，促溶蛋白

注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
3、混入质粒或连接产物时应轻柔操作，感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
4、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
5、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
6、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
7、以上产品均来源于康朗质粒平台，各批次质粒菌株均经过严格的多重验证，确保正确。如存在质量问题，请在收到货物三个月内通知我司，需获取其他详细信息请登录我司官网联系QQ客服查询。   
 
菌种培养及打管说明：
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项：
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与我司销售联系或更换新的菌种。