TMB显色液 蛋白质研究

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TMB显色液 蛋白质研究由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多TMB显色液等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：TMB显色液 蛋白质研究
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：100ml
TMB是HRP的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB 会产生蓝色产物。TMB 显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting)采用最新的单一溶液的 TMB 显色技术，用于 Western 或免疫组化等 HRP的显色检测，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。本显色液具有高灵敏性，与 HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5 ml显色液，则可以检测40次。

本品主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测；本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。

使用方法：
如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

一、免疫组化检测：
1、参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2、洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。
3、室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。
4、去除染色液，加入重蒸水孵育10分钟以终止反应。
5、拍照记录或适当封片后拍照记录。如果有必要，可以使用中性红染色液进行复染后再进行拍照记录或适当封片后拍照记录。

二、膜的HRP显色检测：
1、参考相应的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟左右。
2、洗涤完毕后，去除洗涤液，
3、滴加约适量TMB显色液充分覆盖膜。
4、室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达数小时)，直至显色至预期深浅。
5、直接拍照记录。

常见问题：
一、背景显色太深。
1、如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
2、可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

二、没有显色或显色太弱。
1、适当提高一抗或二抗的浓度。在离心管内用稀释的二抗与染色液反应，检测二抗是否可以被正常显色。
2、可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
3、可以适当延长显色时间。
4、如果上述改进不能获得预期效果，对于免疫组化或Western，可以考虑更换效果更好的一抗；对于Southern、Northern或原位杂交，则可以考虑更换探针。

储存条件：2～8℃，避光，有效期一年。

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·宽分子量蛋白Marker(10～200KD)
编号：RFT051
英文名称：Broad Molecμlar Weight Protein Marker
规格：20T(100μl)
本产品包含14种蛋白质混合物，分子量范围为10kD-200kD，经过SDS-PAGE电泳，用考马斯亮蓝染色后可以得到14条带，可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。



使用方法：

1、第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。
2、取出分装后的Marker，常温融化，轻柔彻底混匀，管底不能见沉淀物。
注：此Marker为即用型，用前不要高温处理！
3、上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量。
4、电泳结束后，染色，观察结果。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

·即用型丽春红染色液
编号：RFT056
英文名称：Ponceau S Staining Solution
规格：100ml
本染色液为即用型工作液，可以直接使用，不用稀释。丽春红染色液可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(NC膜)和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的*基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。注：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。丽春红对蛋白的检测下限是250ng。

使用方法：
1、电泳结束后，将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸泡到适量丽春红染色液中，摇动3-5分钟或更长时间，直至出现清晰条带。
2、用蒸馏水漂洗2-3次，每次3-5分钟，直到膜背景干净为止。
3、观察保存结果。

储存条件：室温，有效期12个月。


TMB显色液 蛋白质研究关键词：TMB显色液,TMB Color Development Solution for IHC or Blotting,RFT084


·2×ligation solution MasterMix
编号：RFT108
规格：150μl
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase，ligation buffer的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算，每次使用5μl，可以使用30次。

注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
2、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

使用方法：
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1．反应体系：

 

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1*
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性平末端载体DNA*	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1**
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。

二、线性DNA的自身环化
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。

三、接头连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性DNA	xμl	100-300 ng
磷酸化接头	yμl	0.5-1 μg
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

储存条件：-20℃


TMB显色液 蛋白质研究关键词：TMB显色液,TMB Color Development Solution for IHC or Blotting,RFT084


·RNase抑制剂
编号：RFT107
英文名称：RNase Inhibitor
规格：2000U|5×2000U
本RNase抑制剂是一种大肠杆菌表达的重组蛋白，可以通过非竞争性方式按1:1比例和RNase A、RNase B或RNase C结合，并抑制这三种酶的活性，保护RNA不被这三种酶降解。但本RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。本品浓度为40U/μl

对于cDNA合成、体外转录、体外翻译等常见的反应体系中，为保护其中的RNA不被RNase降解，RNase Inhibitor推荐用量为最终浓度1-2U/μl。

特点：不含DNA内切酶和外切酶，用于各种RNA相关反应，防止RNase的污染。
用途：用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为人类胎盘中编码该酶的基因。
分子量：约49.6 kDa(单体)。
活性定义：将能够抑制5ng RNase A的50% 活性的酶量定义为一个活性单位。
活性检测条件：100mMTris-HCl (pH7.5)，1.2mMEDTA，0.1mg/ml BSA，100ng/ml RNase A，0.1mg/ml E.coli [3H]-RNA，50mg/ml yeast RNA，8mMDTT。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
储存溶液：20mM HEPES-NaOH (pH7.5)，50mM NaCl，8mM DTT，0.5mM Detergent，50% (v/v) glycerol。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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