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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Adhesion e. coli (EAEC) nucleic acid test kit (pcr-fluorescence probe method)
- 库存:
18
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 规格:
盒
粘附性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应需注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
特点优势:
1. 特异性:
2. 重现性:
3. 灵敏性:
4. 实用性:
粘附性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)性能指标:
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
粘附性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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文献和实验性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌属于细菌。 大肠杆菌
领域。例如,可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷,也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法。在进行PCR扩增特定靶基因序列时,利用γ-32P-ATP标记引物或直接在PCR反应体系中加入α-32P-dCTP进行PCR扩增,使扩增产物带有同位素标记物,然后将扩增产物变性为单链进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,放射自显影显示结果。利用引物标记或碱基掺入法使PCR扩增产物带有同位素标记物,均可使产物信号增强几个数量级。二者相比较,前者经济
进行以确定实验的成功和效率: 在几个小时内,聚合酶链式反应或 PCR 将目标序列的一个拷贝放大到数百万份拷贝。在终点 PCR 之后进行电泳,以确认靶标的扩增及其产量。 在与限制酶反应以切割 DNA 底物上特定序列的限制消化反应后,在凝胶上运行的样品来确定 DNA 切割模式(以及消化完成的程度)。 在分子克隆中,通过称为 连接的过程将 DNA 片段插入载体中。在一些情况下,可以在连接后进行电泳以评估反应效率(图 2)。然后将连接产物用于转化克隆生物体的 感受态细胞,如 大肠杆菌繁殖,然后筛选形成
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