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-20℃
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12个月
- 英文名:
Human immunodeficiency virus (HIV) nucleic acid test kit (pcr-fluorescence probe method)
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18
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 规格:
盒
人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应需注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
特点优势:
1. 特异性:
2. 重现性:
3. 灵敏性:
4. 实用性:
人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)性能指标:
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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文献和实验,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原,来提高敏感性。 (三)核酸检测 用PCR法检测HIV基因,具有快速、高效、敏感和特异等优点,目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中。 (四)病毒分离 常用方法为共培养法,即用正常人外周血液分离单个核细胞,加PHA刺激并培养后,加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。 四、防治原则 自1981年发现爱滋病,随后在世界各地迅速蔓延,据WHO报告,至1995年1月1日全球累积的HIV
领域。例如,可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷,也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法。在进行PCR扩增特定靶基因序列时,利用γ-32P-ATP标记引物或直接在PCR反应体系中加入α-32P-dCTP进行PCR扩增,使扩增产物带有同位素标记物,然后将扩增产物变性为单链进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,放射自显影显示结果。利用引物标记或碱基掺入法使PCR扩增产物带有同位素标记物,均可使产物信号增强几个数量级。二者相比较,前者经济
抗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染免疫 艾滋病(AIDS)由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染导致,主要感染人体CD4T细胞,导致严重免疫缺陷。据联合国"2005年全球艾滋病传播报告”称:自1981年确认HIV病毒感染以来,迄今累计感染人口6 500万,已造成2 800万人死亡,现有AIDS患者3 800万;2005年死亡患者280万,新感染人口约400万;中国目前实际感染人数超过100万,进入快速增长期。由于AIDS导致的获得性免疫缺陷,患者通常伴有广谱性机会
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