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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
pDONR223-DRD2
- 库存:
200
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
5μg
pDONR223-DRD2
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ10616 | pDONR223-DRD2 | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 质粒分类: | 基因文库质粒 |
|---|
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文献和实验用传统的限制酶切和连接的方法产生入门克隆。这些载体配合合适的目的载体,可以用于表达天然蛋白或带有N端或C端融合标签的重组蛋白。为了在真核细胞中有效地翻译蛋白,所有的5个Gateway入门载体提供了Kozak 序列。此外,pENTR11提供了SD (Shine-Dalgarno)序列,便于在大肠杆菌中有效的翻译。2、PCR重组克隆 重组是从PCR产物创建Gateway入门克隆的另一种方法。这种方法是通过合并attB位点到上游和下游引物上,然后共同孵育PCR扩增产物和pDONR载体(包含attP位点
是线性的,如果用质粒必须做酶切,但是事实证明用超螺旋的质粒结果没有区别。5. 同理,用引物在目的基因上下游加入AttL序列后直接进行LR反应也是可行的,可以省去BP反应相关的材料和费用。但是pDONR系列载体自有其优点(载体小,拷贝数高,卡那霉素抗性,容易测序),所以要按实际情况权衡6. 慢病毒载体的空白质粒有大量的重复序列,久存会导致LR反应成功但是转化后抽不出质粒的情况,需要注意。
3. 用SuperScript™ II逆转录酶合成第一链和第二链cDNA 4. 连接attB1接头 5. 加上接头的cDNA和pDONR™222载体混合在BP Clonase™酶存在时构建入门文库 6. 得到的入门克隆有attL位点;产生的副产物是自由的ccdB基因 7. 转化E.coli并选择抗卡那霉素的克隆
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