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载体pDONR223-DRD2

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      pDONR223-DRD2

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      沪震生物

    • 规格

      5μg

    pDONR223-DRD2

    产品信息

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    HZ10616 pDONR223-DRD2

    20μl

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    质粒分类: 基因文库质粒

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    • Gateway技术:克隆、表达新方法

      用传统的限制酶切和连接的方法产生入门克隆。这些载体配合合适的目的载体,可以用于表达天然蛋白或带有N端或C端融合标签的重组蛋白。为了在真核细胞中有效地翻译蛋白,所有的5个Gateway入门载体提供了Kozak 序列。此外,pENTR11提供了SD (Shine-Dalgarno)序列,便于在大肠杆菌中有效的翻译。2、PCR重组克隆 重组是从PCR产物创建Gateway入门克隆的另一种方法。这种方法是通过合并attB位点到上游和下游引物上,然后共同孵育PCR扩增产物和pDONR载体(包含attP位点

    • 【原创】说一说我用Gateway的经验兼答疑

      是线性的,如果用质粒必须做酶切,但是事实证明用超螺旋的质粒结果没有区别。5. 同理,用引物在目的基因上下游加入AttL序列后直接进行LR反应也是可行的,可以省去BP反应相关的材料和费用。但是pDONR系列载体自有其优点(载体小,拷贝数高,卡那霉素抗性,容易测序),所以要按实际情况权衡6. 慢病毒载体的空白质粒有大量的重复序列,久存会导致LR反应成功但是转化后抽不出质粒的情况,需要注意。

    • 构建无需限制性内切酶和连接酶的cDNA文库

      3. 用SuperScript™ II逆转录酶合成第一链和第二链cDNA 4. 连接attB1接头 5. 加上接头的cDNA和pDONR™222载体混合在BP Clonase™酶存在时构建入门文库 6. 得到的入门克隆有attL位点;产生的副产物是自由的ccdB基因 7. 转化E.coli并选择抗卡那霉素的克隆

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