
2×Es Taq MasterMix (Dye)
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- CW0690
- 2025年07月16日
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武汉洁洋盛科技有限公司
| 目录号:CW0690S (1 ml) | ||||||
| CW0690M (5 ml) | ||||||
| CW0690L (25 ml) | ||||||
| 保存条件:-20℃ | ||||||
| 产品内容 | ||||||
| Component | CW0690S | CW0690M | CW0690L | |||
| 1 ml | 5 ml | 25 ml | ||||
| 2×Es Taq MasterMix Dye | 1 ml | 5×1 ml | 5×5 ml | |||
| ddH2O | 1 ml | 5×1 ml | 5×5 ml | |||
注意:2×Es Taq MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和 400 µM each dNTP。
产品简介:
本品是由Es Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良
性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物
3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真
性有要求的基因克隆等实验。
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
| 试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Es Taq MasterMix Dye | 25 μl | 1× |
| Forward Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM |
| Reverse Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM |
| Template DNA | <0.5 μg | <0.5 μg/50 μl |
| ddH2O | up to 50 μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | ||
| 预变性 | 94℃ | 2 min | ||
| 变性 | 94℃ | 30 s | ||
| 55-65 | 30 s | 25-35 个循环 | ||
| 退火 | ℃ | |||
| 延伸 | 72℃ | 30 s | ||
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
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