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2×Es Taq MasterMix (Dye)

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  • 2025年07月16日
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      武汉洁洋盛科技有限公司

    2×Es Taq MasterMix (Dye)
    目录号:CW0690S (1 ml)
    CW0690M (5 ml)
    CW0690L (25 ml)
    保存条件:-20℃
    产品内容
    Component CW0690S CW0690M CW0690L
    1 ml 5 ml 25 ml
    2×Es Taq MasterMix Dye 1 ml 5×1 ml 5×5 ml
    ddH2O 1 ml 5×1 ml 5×5 ml

    注意:2×Es Taq MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和 400 µM each dNTP。


    产品简介:

    本品是由Es Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良

    性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物
    3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真

    性有要求的基因克隆等实验。

    质量控制:


    经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。




    使用方法

    以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

    1. PCR反应体系
    试剂 50 μl反应体系 终浓度
    2×Es Taq MasterMix Dye 25 μl
    Forward Primer,10 µM 2 μl 0.4 μM
    Reverse Primer,10 µM 2 μl 0.4 μM
    Template DNA <0.5 μg <0.5 μg/50 μl
    ddH2O up to 50 μl

    注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。

    2. PCR反应条件
    步骤 温度 时间
    预变性 94℃ 2 min
    变性 94℃ 30 s
    55-65 30 s 25-35 个循环
    退火
    延伸 72℃ 30 s
    终延伸 72℃ 2 min

    注意:

    1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。

    2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。





    本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途


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