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- HZbscience
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- HZ1241
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pT7-His-pCSK9
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5μg
pT7-His-pCSK9
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ1241 | pT7-His-pCSK9 | 20μl |
¥680 |
使用说明
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文献和实验粥样硬化 (atherosclerosis, AS) 的形成1,2。过表达突变的Pcsk9D377Y，能加速LDLR的降解，严重影响血浆中LDL-C的清除能力，最终导致高脂血症。因此我们利用这原理，以AAV作为过表达Pcsk9D377Y的载体，使用APOE的启动子确保能在肝脏中特异表达，诱导野生型小鼠产生动脉粥样硬化，AAV结构如图1所示。 图1. AAV9-Pcsk9D377Y示意图 该模型的构建方法也十分简单,AAV病毒进入循环系统后能倾向于在肝脏中富集，因此，病毒的递送至肝脏十分简单。构建模型时，野生型C57
，比如说，你用的是ＰＬＥＧＦ载体，抗性为Ｇ４１８，按不同的浓度检测如：200μg/ml、400μg/ml－－－－１２００ug/ml共６个梯度，细胞量最好的１０００Cell/ml，以１０－１４天最低浓度至全部细胞死亡为最佳浓度，我用的是ＰＴ６７最佳浓度为８００ug/ml4、转染，观察２４－４８h的转染情况，如达４０%以上，可加入Ｇ４１８筛选，３－５天换一次带药的培养液，一般在１５天即可，具体还看转入不同基因可以有差异，得到较高带ＥＧＦＰ的细胞。５、扩大培养，收集上清。６、收集到的上清可以做密度
问：构建逆转录病毒为载体的DNA（质粒），阳离子脂质体2000（过期的），转染病毒包装细胞pt67，G418筛选，在换液和传代过程中均会有细胞死亡（贴壁细胞漂浮）。求教原因。换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418传代用胰酶ph 7.2，1ml，用0.3ml新生牛血清中和，800rpm离心5min，弃上清，加入上述培养液。答：做一下G418浓度筛选，另外你的对照组未转染的细胞经同样浓度G418筛选后怎样呢？是否本来细胞状态不好？或是根本没有转进去呢？还有就是脂质
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