载体pE6C-EYFP

核蛋白染色时保留细胞质，报告蛋白荧光的改进方法

Rosa26-EYFP（CD4/EYFP）小鼠脾细胞中观察到，未经处理的活细胞EYFP荧光信号最强；然而，使用FoxP3染色试剂盒（含Fix/Perm和Perm两步法）后，EYFP荧光几乎完全消失。值得注意的是，若在标准染色流程前先用2%多聚甲醛（PFA）进行预固定，则EYFP信号可有效保留。 这一现象表明，荧光丢失并非源于荧光蛋白的化学降解，而是由于Fix/Perm缓冲液固定能力不足，导致可溶性胞质EYFP在后续破膜和洗涤步骤中被被动洗脱出细胞。   怎样解决

因为诺奖，这些AAV要火了——诺奖级技术「光遗传学」实操全解析

重要的角色。 但对于真正要做实验的人来说，诺奖只是序章。光遗传学落地，绕不开三件事：选什么光敏蛋白、怎么把蛋白送进细胞、怎么把光照进组织。这三件事，恰恰是这项技术十五年来进化最快的三个方向——光敏蛋白反应更快、表达更精准、光的递送更便捷。下面逐一拆解。 光遗传学的原理 分两步实现"用光操控细胞"：①借助遗传学手段（病毒载体或转基因）将光敏蛋白靶向表达于特定类型细胞；②用特定波长的光照射——光敏蛋白对Cl⁻、Na⁺、H⁺、K⁺等离子的通过具有选择性，光照后细胞膜两侧膜电位发生变化，从而选择性地兴奋

xCELLigence系统实时检测神经毒性

，我们使用神经保护剂BI-6C9，BI-6C9是一种公认的BH-3 小分子抑制剂，可与死亡激动剂（domain death agonist，BID）发生相互作用，是 Bcl-2基因家族的预凋亡成员（4，5）。   总之，研究表明，xCELLigence系统可通过多方面实验，持续对神经细胞培养进行监测，所进行的实验包括接种反应板、预培养、增殖胶质细胞的去除、药物作用，以及对神经毒性与神经保护作用的确认。   材料与方法    HT-22类神经元细胞   按照指定密度接种 HT-22细胞