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- 2025年11月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
pNLCoI4[luc2 -P2A-NlucP /PGK/Hygro] Vector
- 供应商：
普洛麦格
- 规格：
20µg
说明：
基于萤光素酶报告基因的检测系统仍是高通量药物筛选中重而有效的方法。但是待测化合物与萤光素酶报告基因的相互作用导致的假阳性结果会导致不必要的后续工作。pNLCoI 载体是第二代
双报告基因载体系统，能够从同一个mRNA 同时表达萤火虫萤光素酶(luc2) 和融合有PEST 去稳定域的NanoLuc® 萤光素酶(NlucP)。通过来源于猪捷申病毒-1(porcine teschovirus-1) 的P2A 序列能够分别检测两种萤光素酶的表达，其原理是P2A 序列启动了ribosomalskip，同一启动子可调控获得两种非融合酶的表达，且两种萤光素酶与化合物相互作用不同。当这种技术用于高通量化合物筛选中时，实现了与其中一个萤光素酶直接作用而导致的假阳性化合物能够与同时引起两种萤光素酶反应的真正的有效化合物区别开来。pNLCoI 与Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter (NanoDLRTM)Assay System 联合使用，这种检测试剂可以在同一样本中先后检测萤火虫和NanoLuc® 萤光素酶蛋白。两种试剂均能产生半衰期长达2 小时左右的稳定的辉光信号，适用于批量操作检测样本，或者在96、384、1536 多孔板模式下进行筛选。
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文献和实验). The final (F1 + F2 + F3) PCR product was digested with SfI I and cloned in the pComb3X vector29 . The resulting pComb3X-3ZF library vector was used to construct the 6ZF library as follows. First, 10 g of pComb3X-3ZF library vector was digested with Age
Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library
from the GCV selected cells. X. PCR amplify inserts with kit primers (see PCR Amplification). Y. Clone into the TOPOTA vector (Invitrogen) for standard sequencing or submit PCR product for deep sequencing. 3. PCR-Amplify
for Genome Engineering, University of Minnesota, http://www.cge.umn.edu ) It is important to include a selection marker for the isolation of clones that harbor the transposon. The vector described in this protocol contains a hygromycin cassette
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