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- HZbscience
- 中国/美国/德国
- HZ0442
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pFastBac-GST-C
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5μg
pFastBac-GST-C
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0442 | pFastBac-GST-C | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | Polyhedrin |
|---|---|
| 复制子: | pUC ori，F1 ori |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 昆虫细胞载体；杆状病毒组成型表达质粒 |
| 质粒大小: | 5468bp |
| 质粒标签: | N-3C，N-GST |
| 原核抗性: | 氨苄青霉素Ampicillin |
| 筛选标记: | 庆大霉素Gentamicin |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | 昆虫细胞 |
| 诱导方式: | 组成型表达，无需诱导 |
| 5'测序引物: | pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC |
| 3'测序引物: | pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA |
| 备注: | 可表达GST融合蛋白 |
质粒简介
• A choice of pFastBac™ donor plasmids that allow generation of an expression construct containing the gene of interest where expression of the gene of interest is controlled by a baculovirus-specific promoter.
• An E. coli host strain, DH10Bac™, that contains a baculovirus shuttle vector (bacmid) and a helper plasmid, and allows generation of a recombinant bacmid following transposition of the pFastBac™ expression construct.
质粒图谱
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文献和实验Protease 是一种由人鼻病毒 14 型的 3C 蛋白酶和 GST 组成的融合蛋白。它可以特异性的将 pGEX-6P 系列等载体表达出的带有酶底物识别氨基酸序列融合蛋白的 GST 标签进行分离。由于其自身带有 GST 标签，Prescission Protease 能在单一步骤实现 GST 标签的柱上酶切和蛋白质纯化。此蛋白酶在低温条件下具有最佳活性，因此低温孵育不仅可以保证 GST 标签的高效去除，也能维持目标蛋白的活性。 Thrombin 和 Factor Xa 常温下具有较高的酶活，当选
今天进行了GST融合蛋白的表达，pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤：摇菌至A600：0.7，然后加IPTG诱导3小时，温度35度（终浓度：0.3mM)，取1ml诱导后菌，离心去培养基，冰冷PBS洗一次，离心，吸净液体，加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF，100度煮菌5分钟，离心，取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断，（箭头 B） 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的
pull-down实验：是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。其基本原理是先构建靶蛋白-GST融合蛋白载体，然后进行体外表达及纯化。将得到的靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，充当一种“诱饵蛋白”，然后将目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的蛋白，将目的蛋白洗脱下来，通过SDS-PAGE电泳及western blot分析证实两种蛋白间的相互作用。 以上三种方法是比较经典的研究筛选和验证蛋白互作关系
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