规格:2500U
英文名:9°N DNA Ligase
产品简介:
9 o N DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5" -磷酸末端和 3" -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在 45℃-90℃ 范围内均有活性。具体有下列特点:
1.可在高温条件下,连接 DNA 链上的切刻位点
2.具有极高的耐热性,与 PCR 反应条件兼容
3.可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测
4.通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变
反应条件:
1 X 9 oN DNA连接酶反应缓冲液 [10 mM Tris-HCl,600 μM ATP,2.5 mM MgCl2,2.5 mM DTT, 0.1% Triton X -100 (pH 7.5 @ 25℃) ]。1X 9oN DNA连接酶反应缓冲液中,底物 DNA 和酶于 45℃ 温育 15 分钟,或者设定合适的反应条件使用热循环仪进行反应。连接反应通过加入含 50%甘油,50 mM EDTA 和溴酚蓝的混合物来终止。
单位定义(粘性末端活性单位)
1单位指 50 ul 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟能使 50% 的 1 ug BstEII消化的 λ DNA 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切口封闭单位。
Buffer 成分:
10 mM Tris-HCl,50 mM KCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,200μg/ml BSA,50% Glycerol,10 mM ammonium sulfate
注意事项:
9 oN DNA连接酶不能代替 T4 DNA连接酶使用。该酶可以有效连接 12 bp 的互补片段,但却无法连接 4 bp 的互补片段(典型限制酶消化产物)。
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年。