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- 中国大陆
- KL-D9083
- 2025年07月15日
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-20℃
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长期
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大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
10KU|2KU
T4 RNA 连接酶 2，截短型 K227Q
特性:将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异性 cDNA 文库构建
概述:
T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到 RNA 的 3´ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。
T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（M0242）的双点突变体。K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性，K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
连接反应的背景被降为最低是因为:不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶已用于二代测序 small RNA 的文库构建中，优化了接头的连接过程。
来源:
重组 E. coli 菌株，携带有 MBP 融合表达的质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前 249 个氨基酸编码。T4 Rnl2tr K227Q 将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和 227 位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。
反应条件:
1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。
随酶提供的试剂:
10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000
质保声明:
无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
单位定义:
200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请联系我们咨询。
浓度:
200,000 units/ml。
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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
使RNA的 3′－ OH末端与 5′ - 磷酸末端以磷酸二酯键而连结的酶。 EC 6． 5． 1． 3．是 J． Hurwitz等（ 1972）从感染 T4 噬菌体的大肠杆菌中提取的，与促进该噬菌体尾部纤维结合的基因 63的蛋白质为同一物质。作为其反应机理，首先是酶与 ATP形成酶 - AMP复合体，复合体的 AMP与 RNA的 5′ - 磷酸末端形成焦磷酸键，它与 RNA的 3′－ OH末端形成磷酸二酯键将 AMP游离出。一个 RNA链的 5′与 3′末端结合则生成一个环状分子。对基质
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