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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
pHR-SFFV-dcas9-BFP-KRAB
- 库存:
200
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
5ug
pHR-SFFV-dcas9-BFP-KRAB
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0353 | pHR-SFFV-dcas9-BFP-KRAB | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
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文献和实验性激活/抑制:通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点,Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白,dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上,在此基础上,研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件,如转录激活的VP64、VP16等,转录抑制的KRAB等,同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游,即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。dCas9技术原理3.外源过表达和内源激活的区别和选择4.基因干扰和基因敲除的的区别和选择
-of-function)是让基因表达变多或变强,常用三招:直接构建过表达载体、CRISPR-SAM 激活(CRISPRa)、saRNA 上调。功能缺失(loss-of-function)是让基因表达变少或彻底没,常用:RNAi 干扰(shRNA/siRNA)、CRISPR-Cas9 敲除、cas13d 干扰、dCas9-KRAB 转录抑制。优先级一般是 A>B>C>D,以你的实际需求为导向来选,不是越新越好。说白了,一类是"加量",一类是"减量或撤掉",方向完全相反。 它们分别在细胞里怎么跑 过表达是把编码序列连到
国自然/高分文章利器!CRISPR文库筛选保姆级指南:从Cas9递送到表型选择一文打通!
。 2. CRISPRi(基因抑制) Loss-of-function筛选。使用催化失活的dCas9融合转录抑制结构域(如KRAB)。dCas9-sgRNA复合物结合在基因启动子或转录起始位点附近,空间位阻阻碍RNA聚合酶,从而抑制转录。 3. CRISPRa(基因激活) Gain-of-function筛选。dCas9融合强效转录激活结构域,靶向结合启动子区域,强力招募转录机器,上调内源基因表达。 三、实验设计思路——如何讲好一个高分故事?
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