BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究

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BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究
编号：SY0298
规格：500T
产地：国产|进口
英文名：BCA Protein Quantification Kit
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μl）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μl）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。


产品特点

1)灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/ml。
2)速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广，20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项
1)使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2)低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3)实验操作规范，提高上样量的精确度。
4)每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

操作方法

一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。

Vial	稀释液体积(μl)	2mg/ml BSA体积(μl)	BSA终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	125	75	750
E	150	50	500
F	350	50	250
G	375	25	125
H	395	5	25
I	400	0	0=Blank
表一BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/ml）*

*如用比色皿检测，每管需加100μl标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μl。

2. 配制BCA工作液

1)计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
注：比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

2)配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1） ，充分混匀。
注：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。

二、检测方法

1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1)各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入2.0ml BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。
注意：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。
注意：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1)各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
注：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μl标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。

2)每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3)冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。

注意：
a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。
b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4)根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/ml；Y-最终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

附录：
表：BCA蛋白浓度测定的兼容性

名称	耐受浓度
Sodium bicarbonate	100 mM
Sodium phosphate	25 mM
2-Mercaptoethanol	0.01%
Glycercol (pure)	10%
Glycine-HCl, pH 2.8	100 mM
HEPES	100 mM
Hydrochloric acid	100 mM
Leupeptin	10 mg/L
Nickel chloride (in TBS, pH8.0)	10 mM
Nonidet P-40 (NP-40)	5% (w/v)
Octyl β -glucoside	5% (w/v)
Potassium thiocyanate	3.0 M
SDS	5%
Sodium acetate, pH 4.8	200 mM
Sodium azide	0.20%
Sodium hydroxide	100 mM
Sucrose	40%
Triton X-100	5%
Triton X-114, X-305,X-405	1%
Tween-20, Tween-60, Tween-80	5%
Zwittergent	1%
ACES, pH 7.8	25 mM
Acetone	10%
Acetonitrile	10%
Ammonium sulfate	1.5 mM
Aprotinin	10 mg/L
Bicine, pH 8.4	20 Mm
Bis-Tris, pH 6.5	33 mM
Borate, pH 8.5	50 mM
Brij-35	5%
Brij-52	1%
Brij-56, Brij-58	1%
BugBuster protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Calcium chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
CelLytic B Reagent	no interference (undiluted)
Cesium bicarbonate	100 mM
CHAPS	5%
Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0)	0.8 mM
CytoBuster Protein Extraction Reagent	no interference (undiluted)
Deoxycholic acid	5%
Dithioerythritol (DTE)	1 mM
Dithiothreitol (DTT)	1 mM
DMF	10%
DMSO	10%
EDTA	10 mM
EPPS, pH 8.0	100 mM
Ethanol	10%
Ferric chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM
Glucose	10 mM
Glycerol	10%
Guanidine-HCl	4 M
Imidazole, pH 7.0	50 mM
MES, PH6.1	100mM
Methanol	10%
MOPS, pH7.2	100mM
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2	10mM
Octyl β- thioglucpyranoside	5%
PIPES, pH6.8	100mM
PMSF	1 mM
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092)	no interference (undiluted)
Reportasol Extraction Buffer	no interference (undiluted)
Sodium chloride	1 M
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4	200 mM
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2	1mM
Span 20	1%
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0)	no interference (undiluted)
Thimerosal	0.01%
TLCK	0.1mg/L
TPCK	0.1mg/L
Tricine, pH 8.0	25 mM
Triethanolamine, pH 7.8	25 mM
Tris	250 mM
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP)	1 mM
Urea	3M
Zinc chloride (in TBS, pH 8.0)	10 mM

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·CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂
编号：SY0485
规格：100μl
本品是溶于DMSO的CCCP溶液，浓度为50mM，体积为100μl（相当于1mg的总量），常用作一种阳性对照来诱导细胞凋亡，并配合线粒体膜电位检测探针JC-1（货号SY0488）或者JC-10（货号SY0490）来进行相关研究。

CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一种质子载体（H+ ionophore），是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使线粒体内膜对H+产生通透性，导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失，诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜，抑制光合作用；CCCP还可抑制内质网-高尔基体（ER-Golgi）之间的蛋白转运，高亲和力结合细胞色素C氧化酶。

CCCP还具有其他功能：
1）在牛蛙交感神经方面的实验表明，CCCP 可增强促黄体生成素释放激素的释放；
2）作为一种质子导体在葡萄糖存在的情况下影响E.coli 细胞活性；
3）对细胞内*水平的各种调节效应；
4）抑制脂肝酶的分泌；
5）部分抑制pH梯度活化的Cl-摄取以及刷状缘膜的Cl-/Cl-交换等。

英文别名：Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone; m-Cl-CCP; Mesoxalonitrile 3-chlorophenylhydrazone;(3-Chlorophenyl)hydrazonomalononitrile
CAS：555-60-2
分子式：C9H5ClN4
分子量：204.62
纯度：≥97% (TLC)
储存条件：-20℃，有效期12个月
结构式


·高尔基体绿色荧光探针
编号：SY0592
英文名称：Golgi Green (FL C5-Ceramide)
规格：30μl(1mM)
本探针是神经鞘脂（sphingolipid）类荧光探针中的一种，常用于活细胞的脂类运输和代谢研究。另外，作为一种FL标记的神经酰胺（Ceramide）类荧光探针，选择性结合高尔基体复合物。相比较于传统的同类型探针NBD C6-Ceramide，其呈现出更高的摩尔吸光系数和光量子产量，且光稳定性更强。本探针具有浓度依赖性的光学特性，低浓度条件BODIPY FL发绿色荧光，但当细胞结构如高尔基体上富集高浓度探针，其荧光光谱从绿色迁移到红色荧光。除了以上应用，本探针还可用来测定Schwann细胞内脂类合成的速率，以及标记细胞轮廓以助于共聚焦显微镜下观察形态运动。

本探针呈绿色荧光，Ex=505nm，Em=511nm。高浓度也可在620nm处发射红色荧光。本品为溶于DMSO的探针储存液，浓度为1mM，推荐工作浓度为5μM。

CAS：133867-53-5
分子式：C34H54BF2N3O3
分子量：601.63
外观：液体
Ex/Em：505nm/511nm
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月
结构式




BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究关键词：SY0298,BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型),BCA Protein Quantification Kit


·RIPA裂解液(弱)
编号：SY0315
英文名称：RIPA lysis buffer (Weak)
规格：100ml
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

本品为较为温和的裂解液（即RIPA裂解液（弱）），含有sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

注意事项

1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

使用说明：

(一) 细胞样品

1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。


BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究关键词：SY0298,BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型),BCA Protein Quantification Kit

血液基因组DNA提取系统(0.1-20 ml) 
67-97-0 维生素D
F030210 HRP标记山羊抗小鼠IgM抗体 Goat Anti-Mouse IgM*HRP
6-苄*基嘌呤 ACE 1214-39-7
戊二醛固定液(4%)   100ml|500ml
利英*克盐 Androsterone 13573-16-5
莫能菌酸* CMS 22373-78-0
磷酸腺嘌呤 OCBA 70700-30-0
ARB10565 人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)elisa测定使用说明书 Human peroxisome prolifeRators activator receptors alpha,ppar-α ELISA KIT
PY02-353  金氏(King,sB)培养基基础  250克  
003001 兔血浆
HC0052 (带刻度)袋装吸头
阿特拉津 Ceftriaxone sodiu*(代"m") 1912-24-9
*化*溶液(1mol/L)   500ml
0030011 冻干粉兔血浆
ARB13670 兔主要组织相容性复合体I类(MHCI/RLAI)含量测试 Rabbit major Histocomp*(代"a")tibility complexi,mhci/rlai ELISA KIT
HEPES溶液(pH7.5)  1mol/L 100ml
SJ0844 标准胎牛血清

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 蛋白质研究。