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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
一年
- 英文名:
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
- 库存:
330
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家
编号:YT483
品牌:百奥莱博
英文名:Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本品操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
储存条件:-20℃,有效期一年。
除DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家外,我公司正在打折促销以下产品:
·苏氨酸脱氨酶
编号:YT599
英文名称:Threonine Deaminase (Crude Enzyme)
规格:100ml|1L
本酶为大肠杆菌表达的苏氨酸脱氨酶,并经简单纯化获得的可以确保达到一定酶活力的粗酶液,用于催化苏氨酸脱氨,生成2-酮丁酸和氨。
CAS:9024-34-4
外观:半透明黄色溶液
酶促反应:
L-threonine = 2-oxobutanoate + NH3 (overall reaction) (1a) L-threonine = 2-aminobut-2-enoate + H2O
(1b) 2-aminobut-2-enoate = 2-iminobutanoate (spontaneous)
(1c) 2-iminobutanoate + H2O = 2-oxobutanoate + NH3 (spontaneous)
储存条件:-20℃,有效期1个月。
注意事项:
1. 由于本产品需新鲜制备,在您确认订购后约8个工作日才能发货。
2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活,所以收到酶液后请根据需要进行分装,并置于-20℃或更低温度保存。
3. 随着保存时间的延长,酶活力会有一定程度的下降,收到产品后应尽快使用。
4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生,融化后混匀即可,不影响正常使用。
DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家关键词:DNA寡核苷酸退火缓冲液,DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X),YT483,Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
·生物素标记YY1凝胶迁移探针(0.2μM)
编号:YT265
英文名称:Biotin-labeled YY1 Probe For EMSA
规格:200μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的并经生物素(Biotin)标记的YY1 consensus oligonucleotide。这个生物素标记的双链寡核苷酸含有公认的YY1结合位点,可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的生物素标记探针可以进行约200-400个样品的EMSA检测。
YY1 consensus oligo的序列如下:
5"-CGC TCC CCG GCC ATC TTG GCG GCT GGT-3"
3"-GCG AGG GGC CGG TAG AAC CGC CGA CCA-5"
本生物素标记EMSA探针已经过纯化,可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。
注意事项:
1. 避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)的使用说明。
储存条件:-20℃,有效期一年。
·小鼠抗HSP90β抗体
编号:YT728
英文名称:HSP90β Mouse Monoclonal Antibody
规格:50μl
本品为来源于小鼠的抗HSP90β的单克隆抗体。
宿主:小鼠
克隆性:单克隆抗体
用途:WB,IHC
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
分子量:84KDa
推荐稀释比例:WB(1:1000),IHC(1:20-1:40)
| About this Antibody | |
| Name | HSP90β Mouse Monoclonal Antibody |
| Category | Monoclonal antibody(mAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG2a |
| Purification | ProA affinity purified |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | This antibody is produced by immunizing mice with a synthetic peptide (KLH-coupled) corresponding to HSP90 beta . |
| Gene ID | 3326 |
| SwissProt | P08238 |
| Synonyms | Heat shock 90KD protein 1 beta; HS90B; HSP90B; HSP90 beta; HSPCB; HSPC2; HSP 90b; HSP84 |
| Category | Protein Folding and Trafficking |
| Background | Hsp90 are molecular chaperones expressed constitutively under normal conditions to maintain protein homeostasis and are induced upon environmental stress. Two isoforms which correspond to the major and minor isoform , (Hsp90 α and Hsp90 β ) can be found in nearly equal amount in humans, and operates as part of a multichaperone machinery in the cytosol, which includes Hsp70, peptidyl-prolyl isomerases and other cochaperones. |
注意事项:
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果,请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
储存条件:-20℃,有效期一年。
DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家关键词:DNA寡核苷酸退火缓冲液,DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X),YT483,Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
·细菌冻存液(细菌保存液)
编号:YT033
英文名称:Bacterial Cryopreservation Solution
规格:50ml
本品可以用于各种常见细菌的冷冻保存。通常-20℃可以保存菌种一年,-80℃可以长期保存菌种。本细菌冻存液操作简单,只需把待保存的细菌沉淀用细菌冻存液重悬即可。如果每个菌种共保存250微升,一个包装的细菌冻存液可以保存200个细菌样品。
注意事项:
1. 细菌冻存液必须在超净台内使用,以避免杂菌污染。
2. 细菌冻存液必须和细菌混匀,否则细菌冻存液无法起到在低温冷冻条件下对细菌的保护作用。
3. 新鲜的对数期细菌冻存效果最好,但非对数期的或不是新鲜培养的细菌也可以用本细菌冻存液冷冻保存。
储存条件:-20℃,有效期一年。
·EDTA溶液(0.5M)(pH8.0)
编号:YT412
英文名称:0.5M EDTA pH8.0
规格:100ml
本品为0.5M EDTA pH8.0用EDTA配制,用NaOH调节pH值至8.0,常用分子生物学试剂,用于螯合镁离子等。
储存条件:室温。
·Calpain 1 Large Subunit抗体
编号:YT652
英文名称:anti-Calpain 1 Large Subunit antibody
规格:>20次
本抗体是用人工合成的人Calpain 1 large subunit一段多肽进行适当修饰后免疫rabbit,然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。
本Calpain 1 large subunit抗体可以检测内源性calpain 1 large subunit,也可以检测calpain 1 large subunit在Leu28位剪切产生的片段(calpain 1 large subunit autoproteolytically cleaved at Leu28)。
Calpains是一类定位在细胞浆中,高度保守的,并且在哺乳动物组织中广泛存在的Ca2+依赖的半胱氨酸蛋白酶。有功能活性的calpain是由一个30kDa的调节亚基和一个80kDa左右的催化亚基组成的异源二聚体。Calpain 1和calpain 2的30kDa小亚基是相同的,但80kDa的大亚基则不同。在体外,calpain 1的激活需要微摩尔(μM)浓度的钙离子,calpain 2的激活则需要毫摩尔(mM)浓度的钙离子,因此calpain 1也被称为mu-calpain或μ-calpain,而calpain 2也被称为m-calpain。目前已有大量的关于calpain的活性调节的研究,表明其蛋白酶活性主要为转录后调节,机制主要有钙离子浓度调控、异源二聚体的亚细胞定位、通过EGFR-Erk信号通路诱导的磷酸化、内源性抑制剂(calpastatin)和自身剪切。Calpastatin可以抑制calpain在Gly27和Leu28之间的自身剪切。Calpains剪切的蛋白底物包括生长因子受体或激素受体、蛋白激酶、磷酸酯酶和细胞骨架蛋白等。Calpain可以影响细胞粘附和细胞骨架重排。Calpain可以通过激活Rac1和RhoA,影响focal adhesion形成,影响细胞的铺展和迁移。Calpain活性的控制受到药品开发研究的关注,calpain活性的抑制可以减缓肿瘤侵袭或改善慢性炎症。目前还发现calpain和2型糖尿病、神经退行性疾病、肌肉萎缩症、脑缺血和脑损伤有关。
组份:
Calpain 1 Large Subunit抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
宿主:兔
免疫原物种:人
免疫原:人工合成的人Calpain 1 large subunit一段多肽
抗体识别位点:Calpain 1 large subunit
分子量:75/80kD
应用:WB,IF
推荐稀释比例:WB(1:1000), IF(1:100)
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体,Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜,如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
储存条件:-20℃,有效期一年。
北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销售商,恭候您的咨询选购DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)厂家。
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文献和实验的能力,如果结合了那才是真正的参与转录的转炉银子, 有的入核后却不能和DNA结合,只能等着被降解! 其实总体而言大家做试验时都希望成功,但是EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节! 我觉的EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功
一、材料准备 4μL5X T4激酶缓冲液 5 μl [γ-32P] ATP(7000次/毫摩尔) 10 μl 水+寡核苷酸(200毫微克) 1 μl T4激酶 1. 37摄氏度1小时 2. 热失活,在75℃下10分钟。 3. 加入1 μl 糖原(20毫克/毫升),2 μl 4M乙酸铵,90 μl 的乙醇。 4. 重悬沉淀,26 μl 水,并加入26 μl 4M醋酸铵,110 μl 乙醇。 5. 重悬沉淀,在5 μl 的水混合。 二、实验
, PAGE 等手段纯化引物,成品引物用 C18 浓缩、脱盐,沉淀。沉淀后的引物用水悬浮,测定 OD260 定量,根据定单要求分装。2. 引物纯化方式有哪些,如何选择?◆ 脱盐寡核苷酸合成后,为了纯化寡核苷酸成为天然的 DNA 结构,首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理,合成的寡核苷酸从固相载体上分离, 2- 氰乙氧基--磷酸二脂键的保护基团,以及碱基的保护基团基(苯甲酰基和异丁基)被去除,从而形成了天然的 DNA 结构。然而,必要的去保护步骤完成后,寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机
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