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- HZbscience
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- HZ8501
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pET28a-SGN
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5ug
pET28a-SGN
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ8501 | pET28a-SGN | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori |
| 终止子: | T7-ter |
| 质粒分类: | 大肠杆菌SGN基因编辑质粒 |
| 质粒大小: | 7009bp |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan |
质粒简介
推测SGN产生大片段DNA删除的机制(Xu et al.,2016 [6])在GenomeBiology同期配发的ResearchHighlight[7]中，NIH的Shawn MBurgess教授总结了SGN的三个关键特征，
1.FEN-1与FokI切割结构域形成的融合蛋白（SGN）可以通过利用DNA寡聚体（向导DNA）去靶向突变特定基因位点。
2. 这种靶向突变方式倾向于产生大片段DNA的删除，删除片断可达几百至几千个碱基对。
3.SGN在斑马鱼胚胎中已显示出效果，表明这种基因编辑技术在模式动物中具备可行性。Burgess教授还宣称[7]，在基因编辑上，SGN是一个令人激动的新选择，因为SGN非常灵活、简便，并且具有删除大片段DNA的潜力。这对于想要通过灭活某个基因以达到基因治疗或遗传改良效果的研究者来说，无疑是一大喜讯。此外，大片段DNA删除还可以防止在研究中出现的假阴性。
相较于评论专家及领域内研究者们的兴奋，该文章的作者们却表现得相当平静，赵庆顺教授对中国生物物理学会的采访者表示，这一项新技术才刚刚起步，SGN在很多方面都需要在后续工作中不断去优化和探索。
质粒图谱
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
蛋白。由于IPTG不会被宿主菌利用，因此向培养液中加入少量的IPTG 就能lacUV5强启动子产生持久的诱导作用。 2.材料与方法 1）.Taq DNA聚合酶表达载体构建 Nde1,Sal1双酶切通过pcr引进此双酶切位点taq酶基因，经过T4连接酶连接，将长度为2496bp的 taq聚合酶基因，插入同样双酶切的PET28a载体中。 2）.工程菌的转化 通过热击转化的方法，将连接产物转化BL21(DE3)表达菌株，通过菌落pcr,提取质粒酶切鉴定确认taq酶基因已经确实插入PET28a载体，送
/3705932_0.html L4440载体的图谱http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5887607_0.html pET载体图谱全收录（精华帖）：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3089611&sty=3&keywords=%D4%D8%CC%E5+%CD%BC%C6%D7 pET28a+载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/6081888
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