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- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
pCold-GST
- 库存:
200
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
5ug
pCold-GST
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0337 | pCold-GST | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | CSPA |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体;pCold系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5097bp |
| 质粒标签: | N-GST, N-HRV 3C蛋白酶切位点,N-His |
| 原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃,有氧,LB |
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | pCold Forward: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
| 3'测序引物: | pCold Reverse 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
| 备注: | pCold-GST载体表达GST融合蛋白,GST标签可以提高目的蛋白的可溶性,提高目的蛋白的纯度。 |
质粒简介
质粒图谱
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文献和实验今天进行了GST融合蛋白的表达,pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤:摇菌至A600:0.7,然后加IPTG诱导3小时,温度35度(终浓度:0.3mM),取1ml诱导后菌,离心去培养基,冰冷PBS洗一次,离心,吸净液体,加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF,100度煮菌5分钟,离心,取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断,(箭头 B) 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的
Protease 是一种由人鼻病毒 14 型的 3C 蛋白酶和 GST 组成的融合蛋白。它可以特异性的将 pGEX-6P 系列等载体表达出的带有酶底物识别氨基酸序列融合蛋白的 GST 标签进行分离。由于其自身带有 GST 标签,Prescission Protease 能在单一步骤实现 GST 标签的柱上酶切和蛋白质纯化。此蛋白酶在低温条件下具有最佳活性,因此低温孵育不仅可以保证 GST 标签的高效去除,也能维持目标蛋白的活性。 Thrombin 和 Factor Xa 常温下具有较高的酶活,当选
pull-down实验:是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。其基本原理是先构建靶蛋白-GST融合蛋白载体,然后进行体外表达及纯化。将得到的靶蛋白-GST(Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶)融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,充当一种“诱饵蛋白”,然后将目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的蛋白,将目的蛋白洗脱下来,通过SDS-PAGE电泳及western blot分析证实两种蛋白间的相互作用。 以上三种方法是比较经典的研究筛选和验证蛋白互作关系
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