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载体pCold-GST

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  • 中国/美国/德国
  • HZ0337
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      半年

    • 英文名

      pCold-GST

    • 库存

      200

    • 供应商

      沪震生物

    • 规格

      5ug

    pCold-GST

    产品信息

    产品货号 产品名称 产品规格 优惠价
    HZ0337 pCold-GST

    20μl

    ¥请询价

    使用说明

    沪震质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品的三个月内通知我司。收到质粒后请短暂离心,取2μl转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用。

    基本信息

    启动子: CSPA
    复制子: ColE1 ori
    质粒分类: 大肠杆菌载体;pCold系列表达质粒
    质粒大小: 5097bp
    质粒标签: N-GST, N-HRV 3C蛋白酶切位点,N-His
    原核抗性: 氨苄青霉素Amp
    克隆菌株: DH5α
    培养条件: 37℃,有氧,LB
    表达宿主: 大肠杆菌
    诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
    5'测序引物: pCold Forward: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3
    3'测序引物: pCold Reverse 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3
    备注: pCold-GST载体表达GST融合蛋白,GST标签可以提高目的蛋白的可溶性,提高目的蛋白的纯度。

    质粒简介

    pCold GST DNA在冷休克载体的基础上,整合了来源于Schistosoma japonicum的谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases, GST)可溶性标签。通过GST在目的蛋白质N末端的融合表达,可提高融合蛋白质的稳定性和可溶性。本制品在cspA启动子的下游插入了5’非编码区(5’-UTR)、翻译增强元件(TEE)、His标签、GST标签和多克隆位点(MCS)(下图)。此外,在cspA启动子下游还插入了可以严格调控目的基因表达的lac operator。GST标签融合蛋白质可进行高亲和性纯化。在GST标签和多克隆位点(MCS)之间插入了高特异性HRV 3C Protease 的识别序列,可从融合蛋白质中去除标签。HRV 3C Protease的最适温度为4~5℃,可以在温和的条件下进行目的蛋白质的标签去除反应。pCold 系列载体的启动子是大肠杆菌来源的,所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。
    产品细节图片1

    质粒图谱

    产品细节图片2

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    相关实验
    • GST融合蛋白表达的问题,很怪,请高手热烈讨论

      今天进行了GST融合蛋白的表达,pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤:摇菌至A600:0.7,然后加IPTG诱导3小时,温度35度(终浓度:0.3mM),取1ml诱导后菌,离心去培养基,冰冷PBS洗一次,离心,吸净液体,加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF,100度煮菌5分钟,离心,取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断,(箭头 B) 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的

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