抗体孵育湿盒 抗体孵育盒 免疫组化湿盒

抗体孵育：一种抗体一个脾气

未完全溶解时，微小的颗粒会粘附在膜上增加星点状背景。 紧接封闭操作的是抗体孵育，之间不要用TBST漂洗。抗体孵育成败的关键首要在抗体本身的质量，包括抗体的效价和背景的强弱。 抗体公司在出售抗体的时候，在广告上会玩很多花样。A.不给整张膜标记的图示。很多抗体质量不好，背景高杂带多，如果靶蛋白区域较干净时，他们通常只给很窄的一条靶蛋白区域的图例。B.不给内源性蛋白标记的图示，用IP的样品取代。通过IP可以富集抗原，减少杂蛋白，通常很容易拿到背景很干净，信号很强的图例。C.用制备抗体时高表达

石蜡切片免疫组化实验步骤

。 将修复盒从微波炉中拿出，自然冷却降温，当修复液降至室温后取出玻片，PBS（pH 7.4）冲洗3遍，每次3 min（冲洗过程中切勿对着组织冲洗，以免弄破组织）。 灭活 将配制好的 3 %的过氧化氢（去离子水稀释30%过氧化氢）滴加于切片组织上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15 min，PBS 冲洗 3 次，每次 3 min。 抗体孵育 吸水纸吸干 PBS，在玻片上滴加 5%的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），37 ℃封闭 30 min。 用吸水纸擦干玻片组织周围的液体，用油

WB实战指南（四）之 难点：抗体孵育

抗体孵育——WB真正的难点：抗体的使用是一种艺术，一种抗体一个脾气。对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。无论你如何提高自己的转膜技术，高效和低效之间往往只有数倍的差异，而抗体的效价可以差数千倍以上；同样，正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，谋求特异性和非特异性背景之间差异的最大化。 封闭最短可以缩减到5min： 很多人把高背景或者黑板，认定为封闭不充分，其实这也是没有吃透WB（说实话，经常看到坛子上很多人这样给人答疑，非常的无语）；实际上封闭（极端