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- ATCC
- 美国
- AC0029
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
XL10-Gold Strain
- 库存：
20
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
株
XL10-Gold大肠杆菌克隆菌
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文献和实验保持相对较高拷贝数的同时使本底表达对于细胞的毒性降至最低的效果。MR 系列 ® －克隆甲基化 DNA 真核基因组DNA常常因高度甲基化而被大肠杆菌修饰系统切割、删除，在构建文库时，由于要对cDNA进行甲基化保护，某些cDNA克隆也较难完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突变删除了修饰系统的感受态细胞，可以构建质量非常高的cDNA和基因组文库。这些细胞包括：用于大质粒克隆的XL10-Gold®超级感受态细胞，克隆连接DNA、转化效率 目前最高
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
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